استخراج DNA از خون مرغ با استفاده از روش نمکی بهینه یافته

Abstract

استخراج DNA ژنومی با کیفیت مناسب در مطالعات مختلف ژنتیکی و اصلاح نژادی از اهمیت بالایی برخوردار است. اگرچه اصول استخراج DNA در سلول‌های مختلف گیاهی، جانوری و باکتریایی نسبتاً مشابه می باشد، اما به منظور کارآیی بالاتر، صرفه‌جویی در زمان و هزینه لازم است بر اساس هدف تحقیق، نوع گونه و نوع سلول‌ تغییراتی در روش استخراج DNA ایجاد گردد. یکی از روش‌های استخراج DNA، روش نمکی یا Salting-Out می‌باشد که با انجام برخی تغییرات برای گونه‌های دام‌های اهلی بهینه‌سازی شده است. هدف از انجام پژوهش حاضر ارایه یک روش نمکی بهینه برای استخراج DNA از خون مرغ بود. بدین منظور، برخی تغییرات در حجم خون، مقدار مصرف مواد و بافرها و نیز روش جمع‌آوری DNA تغلیظ شده ایجاد شد. به منظور ارزیابی روش بهینه شده، تعداد 400 نمونه خون مرغ جهت استخراج DNA ژنومی مورد استفاده قرار گرفت. سپس کیفیت و کمیت DNA استخراج شده با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگارز یک درصد و اسپکتوفتومتری تعیین گردید. نتایج الکتروفورز نشان داد که نمونه‌های DNA استخراج شده کیفیت مطلوبی را داشته و کمترین میزان شکستگی را داشتند. همچنین نتایج ارزیابی کیفی نمونه‌های DNA با استفاده از اسپکتروفتومتر نشان داد که نسبت جذب 260 به 280 در اغلب نمونه‌ها در محدوده 7/1 تا 9/1 قرار داشته که نشان دهنده کیفیت مطلوب و مناسب آن برای استفاده در مراحل بعدی از جمله واکنش زنجیره‌ای پلیمراز می‌باشند.