آنالیز گیاهان نارنج (Citrus aurantium) تراریخت حامل ژن پروتئین پوششی ویروس تریستیزای مرکبات

Abstract

درخت نارنج دارای ویژگی‌های با ارزشِ یک پایه ایده‌آل در مرکبات است اما، این گیاه به بیماری ویروس تریستزای مرکبات (CTV) به شدت حساس است. بر این اساس، بذور نارنج در شرایط <em>in vitro</em> کشت و به مدت 4 هفته درتاریکی و10 روز در روشنایی رشد کردند. ریز نمونه ها از اپی‌کوتیل وهیپوکوتیل تهیه و با استفاده از <em>Agrobacterium tumefaciens</em> نژاد EHA105 حامل وکتور خاموشی pFGC5941 و بخشی از ژن کدکننده پوشش پروتئینی CTV، به مدت 3روز هم‌کشت شدند. سپس ریزنمونه‌ها به محیط کشت انتخابی حاوی علفکش بستا و ترکیبی از تنظیم کننده‌های رشد BAP و NAA منتقل شدند. در اولین غربالگری تعدادی برگ از گیاهچه‌های تراریخت احتمالی در محیطهای MS مایع و همچنین MS جامد حاوی غلظت‌های مختلف علفکش بستا منتقل شدند. تعدادی از قطعات برگی در محیط انتخابی به رنگ سبز باقی ماندند و برگ گیاهان شاهد و غیرتراریخت‌ها سفید رنگ شدند. در مرحله بعد واکنش PCR با آغازگرهای اختصاصی ژن‌های <em>CTV</em> و <em>BAR</em> در میان گیاهان باقی مانده از غربالگری اولیه انجام و برخی از باندها توالی یابی شدند. تعداد نسخه‌های تراژن <em>CTV</em> با استفاده از تکنیک quantitative Real-Time در تعدادی از گیاهچه‌های نارنج محاسبه و تعداد آن‌ها بین 4-1 نسخه در ژنوم تعیین شد. تکثیر ویروس مطالعه و تست الایزا نشان داد که ویروس در گیاهان تراریخت تکثیر نشده است. در این تحقیق، روش‌های آسان و اقتصادی برای غربالگری اجرا شد که با استفاده از آن‌ها تمایز درست گیاهان تراریخت در مقابل غیرتراریخت نارنج امکان‌پذیر شد.