طراحی، ساخت و انتقال سازه‌های ژنی جهت خاموش‌سازی ژن‌های F3′5′H و F3′H در انگور رقم شیراز

Abstract

به‌منظور مطالعۀ عملکرد ژن‏های <em>F3´5´H</em> و <em>F3´H </em>وبرهمکنش آن‌ها در مسیر بیوسنتز فلاونوئیدها در انگور، از طریق طراحی و ساخت سازه‌های مناسب ایجاد‌کنندۀ ihpRNA، لاین‌های تراریخت حاوی سازۀ خاموش‌کنندۀ ژن <em>F3´H </em>وسازۀ خاموش‏کنندۀ هر دو ژن <em>F3´5´H </em>و <em>F3´H</em> ایجاد شدند. به این منظور‌ قطعاتی از دو ژن انتخاب و به‌صورت تکرارهای معکوس در ناقل pHANNIBAL درج و با بهره‌گیری از سیستم ناقل دوگانه، هر یک از سازه‌های تهیه‌شده وارد ناقل p27 mod GFP 4a و به اگروباکتری منتقل شد. کالوس‌های جنین‌زای حاصل از کشت پرچم، توسط کشت توأم با اگروباکتری تراریخت شدند. بیان ژن <em>GFP</em> در کالوس‌های جنین‌زا، پنج روز پس از تلقیح با میکروسکوپ مشاهده شد. در‌نهایت از کشت کالوس‌های جنین‌زای دارای سازۀ خاموشی ژن <em>F3′H</em>وسازۀ خاموشی هم‌زمان<em>F3′H</em> و <em>F3′5′H</em> به<em>‌</em>ترتیب 42 و 34 لاین باززایی شدند که بر‌اساس واکنش زنجیره‌ای پلیمراز، 36 لاین برای سازۀ خاموشی ژن <em>F3′H</em> و 27 لاین برای سازۀ خاموشی هم‌زمان<em>F3′H</em> و <em>F3′5′H، </em>مثبت ارزیابی شدند که این نتیجه نشان از کارایی بالای روش باززایی و تراریختی استفاده‌شده بود