شناسایی کریپتوسپوریدیوم پارووم‌ ‌با روش PCR و تعیین الگوی پروتئینی وآنتی ژن‌های ایمونوژنیک آن

Abstract

‌چکیده کریپتوسپوریدیوم تک یاخته‌ای از شاخه اپی کمپلکسا است که در بسیاری از حیوانات و انسان موجب اسهال می‌شود. از آنجایی که این تک یاخته خسارات اقتصادی قابل توجهی به صنعت دامپروری ایران وارد می‌سازد، شناسایی مولکولی تک یاخته وتعیین الگوی پروتئینی و آنتی‌ژن‌های امیونوژنتیک آن هدف این مطالعه می‌باشد. در این مطالعه ازمدفوع اسهالی گوساله مشکوک به کریپتوسپوریدیوز پس از تشخیص میکروسکوپی اوسیستهای کریپتوسپوریدیوم جداسازی و تخلیص شد. استخراج DNA از اووسیستها انجام پذیرفت و با پرایمرهای اختصاصی منشعب از ژن S ribosomal RNA18کریپتوسپوریدیوم پاروم‌ ‌با روش Semi-nested PCR اختصاصی بودن اووسیستهای کریپتوسپوریدیوم پارووم‌ ‌تایید گردید. یک راس گوساله سرم منفی از نظر آنتی بادیهای ضد کریپتوسپوریدیوم با610‌ x 5 اووسیست کریپتوسپوریدیوم تخلیص شده به طریق تجربی آلوده شد. 5 روز بعد اووسیستها از مدفوع جمع آوری و تخلیص گردید. پس از جداسازی و تخلیص، تعیین الگوی پروتئینی با استفاده از روش SDS-PAGE انجام پذیرفت. باندهای پروتئینی اسپروزوئیتها در محدوده‌ای بین 10 تا 100 کیلودالتون قرار گرفتند. ده باند قابل تشخیص در محدوده 20 تا 40 کیلودالتون قرار گرفت. در محدوده 40 تا 70 کیلودالتون شش باند قابل رویت بودند. شناسایی پروتئینهای ایمونوژنیک با روش وسترن بلات انجام پذیرفت.، باندهای ایمنوژنیک در محدوده‌ای بین 17 تا 260 کیلو دالتون مشاهده شد که وزن مولکولی نسبی سه باند آن در محدوده 20 تا 30 کیلودالتون، سه باند در محدوده 30تا 40 کیلودالتون، سه باند در محدوده 40 تا 60 کیلودالتون، ودو باند در محدوده 80-70 کیلودالتون و چهار باند سنگین به اندازه نسبی 130، 170، 216 و 257 کیلودالتون بودند. واژه‌های کلیدی: کریپتوسپوریدیو پارووم، ایمنوبلات، SDS-PAGE، PCR ،..Seminested-PCR