کلون و بیان ژن vp1 ویروس تب برفکی و fliC سالمونلا در باکتری اشرشیاکلای

Abstract

تب برفکی یک بیماری وزیکولی ویروسی است که منجر به بروز خسارات وسیع در صنعت دامپروری می گردد. امروزه برای کنترل این بیماری از ویروس غیرفعال شده استفاده می شود کهمهمترین نقطه ضعف آن کوتاه بودن طول دوره ایمنی است.لذا تلاش های زیادی در زمینه بکارگیری ادجوانهای موثر تر در فرمولاسیون واکسن صورت گرفته است. هدف از این تحقیق تولید فیوژن پروتئین VP1 ویروس تب برفکی (Opanasia2) و فلاژلین سالمونلا (<em>fliC</em>)به عنوان یک ادجوانت ملکولی استژن <em>1D</em>که مسئول سنتز پروتئین VP1است به طولbp 800 توسط PCR تکثیر داده شد و در وکتور PTZ57 کلون گردید, سپس این وکتور توسط آنزیم های<em>Hind</em>III و <em>Xho</em>I برش داده شده و در داخل ناقل بیانی pET41b که حاوی ژن فلاژلین سالمونلا بود کلون گردید. پلاسمید نوترکیب به باکتری <em>Escherichia coli</em>(BL21DE3) انتقال داده شد و بیان توسط IPTG(0.5 mM) القا گردید. بیان پروتئین توسطSDS-PAGE در ژل آکریل آمید 12% و وسترن بلات مورد بررسی قرار گرفت. الحاق ژن های <em>vp1</em>و <em>fliC</em>با استفاده از روش PCR و هضم آنزیمی با دو آنزیم <em>Hind</em>IIIو <em>Xho</em>Iبا مشاهده باند هایی به طولهای تقریبی bp700 و 1500 تایید گردید. برای خالص سازی از رزین Ni-NTA و گرادیان pH استفاده شد که بیشترین میزان بازیافت پروتئین در5/4 pHمشاهده گردید. بیان پروتئین با مشاهده باند KDa76در آزمایش SDS-PAGE در ژل 12% آکریل آمید ووسترنبلات توسطAntiHis دررسوب باکتریالقاءشده تاییدگردید.با توجه به نتایج به دست آمده ژن فیوژن <em>vp1</em>- <em>fliC_salmonella</em> با طول 2200 bpکلون گردیده و پروتئین حاصل باوزنKDa76با موفقیت بیان و تخلیص گردید.