بررسی تاثیر مهاری پروبیوتیک مهندسی شده لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس بر رشد سالمونلا انتریتیدیس

Abstract

ﭘﺮوﺑﻴوتیک‌ها اﺟﺰ‌ای ﺳﻠﻮﻟﻲ ﻣﻴﻜﺮوﺑﻲ زﻧﺪه‌ای ﻫﺴﺘﻨﺪ ﻛﻪ وﻗﺘﻲ وارد دﺳﺘﮕﺎه ﮔﻮارش می‌شوند یک یا چند اثر مفید را روی سلامتی میزبان می‌گذارند. هدف از این تحقیق تولید و بررسی اثرات باکتری پروبیوتیک لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس (ATCC 4356) بیان کننده پپتید Tachyplesin I خرچنگ نعل اسبی بر رشد باکتری سالمونلا انتریتیدیس (ATCC 13311) است. پلاسمید نوترکیب pNZ8148- Tachyplesin I به روش شوک حرارتی وارد باکتری E.coli شد و سپس تخلیص شد‌. در مرحله بعد وکتور نوترکیب حاوی ژن Tachyplesin I به روش الکتروپوریشن وارد باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس شد و غربالگری توسط آنتی‌بیوتیک کلرامفنیکل و PCR انجام گرفت. سپس تاثیر مهاری باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس مهندسی شده بر روی رشد سالمونلا بررسی و با دیسک‌های آنتی بیوتیکی مقایسه گردید. ورود پلاسمید pNZ8148-Tachyplesin I درون باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس به کمک آنتی بیوتیک و واکنش PCR تایید شد. سپس لاکتوباسیلوس مهندسی شده تاثیر مهاری بر روی رشد باکتری سالمونلا را نشان داد، به صورتی‌که قطر هاله عدم رشد ایجاد شده بر روی سالمونلا تحت تاثیر لاکتوباسیلوس مهندسی شده قابل قبول بود. پس از مقایسه قطر هاله‌های دیسک‌های آنتی‌بیوتیکی آمپیسیلین، کلرامفنیکل و تتراسایکلین با لاکتوباسیلوس مهندسی شده و انجام آنالیز آماری، بین لاکتوباسیلوس دستکاری نشده (کنترل) و لاکتوباسیلوس بیان کننده ژن Tachyplesin تفاوت معنی دار در هاله عدم رشد دیده شد.با توجه به این که حضور ژنI Tachyplesin درون لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس تایید شد، هاله عدم رشد حاصل از آن در اطراف سالمونلا نشان دهنده این مطلب است که بیان و ترشح ژن Tachyplesin I درون لاکتوباسیلوس اثری مشابه آنتی-بیوتیک بر سالمونلا دارد.