انتقال و بیان ژن GnRH نوترکیب ماهی در باکتری BL21 E. coli به منظور تولید هورمون نوترکیب

Abstract

هورمون آزاد کننده گنادوتروپین (GnRH) یک نوروپپتید موثر در تنظیم فرآیند تولیدمثل در مهره­داران می­باشد. آنالوگ­های مختلفی از این هورمون به فرم سنتتیک با نیمه عمرهای مختلف برای تکثیر مصنوعی آبزیان در بازار موجود می­­باشند. هدف از این تحقیق بررسی بیان GnRH نوترکیب در باکتری <em>Escherichia coli</em>سویه BL21به منظور تولید هورمون نوترکیب می­­باشد. در این تحقیق، توالی DNA مربوط به پپتید GnRH طراحی شده در وکتور بیانی pET28a⁺کلون شد. واکنش زنجیره­ای پلیمراز (PCR) به کمک آغازگرهای اختصاصی صحت کلونینگ را نشان داد. وکتور نوترکیب pET28a⁺/GnRH به باکتری بیانی <em>E. coli</em> BL21 (DE3) انتقال داده شد و صحت انتقال با کلونی PCR سنجیده شد و باند 186 جفت بازی حاصل از تکثیر ژن بر روی ژل آگارز مشاهده گردید. سپس برای بررسی بیان، باکتری نوترکیب در محیط Luria Bertani (LB) حاوی آنتی­بیوتیک کانامایسین در دمای 37 درجه سانتی­گراد کشت داده شد و با غلظت یک میلی­مولار Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranpside (IPTG) القاء شد و بعد از القاء، باکتری در دو دما و زمان مختلف شامل 6 ساعت در دمای 37 درجه سانتی­گراد و 24 ساعت در دمای 20 درجه سانتی­گراد قرار گرفت. میزان بیان به کمک الکتروفورز ژل SDS-PAGE تعیین شد. بررسی SDS-PAGE نشان­دهنده بیان پپتید بوده و باند هشت کیلودالتونی مربوط به پپتید مورد نظر بر روی ژل قابل مشاهده بود همچنین میزان بیان پپتید در دمای 20 درجه سانتی­گراد بیشتر از دمای 37 درجه سانتی­گراد می­باشد. با توجه به نتایج بدست آمده از تحقیق حاضر می­توان نتیجه گرفت که هورمون GnRH قابلیت تولید در سیستم بیانی پروکاریوتی همانند اشریشیاکلی را دارد و پس از خالص سازی می­تواند به­عنوان یک همولوگ خاص برای درمان اختلالات تولیدمثلی در آبزیان معرفی گردد.