استخراج و خالص سازی آنزیم تریپسین از روده ماهی سفید (Rutilus frisii kutum) و محاسبه ی پارامترهای سینتیکی و نیمه عمر آن

Abstract

در دهه های اخیر بازیافت و شناسایی آنزیم های گوارشی از ماهی ها توجه زیادی را به خود جلب کرده است و کاربردهای جدیدی نیز برای این آنزیم ها در برخی از صنایع، از قبیل صنعت غذا و صنایع شوینده تعریف شده است. یکی از این آنزیم های استخراج شده تریپسین است که در این پژوهش با استفاده از روش سه مرحله ای استخراج با بافر Tris–HCl 50 میلی مولار (حاوی 10 میلی مولارCaCl₂ با pH 5/7)، ترسیب با سولفات آمونیوم60% اشباع و کروماتوگرافی غربالی Sephadex G-75 از روده ماهی سفید استخراج و خالص سازی شد و در نتیجه آن بازده 52% و میزان تخلیص 78/25 برابر (fold) به دست آمد. پارامترهای سینتیکی V_max و K_m با استفاده از معادله ی میکائیلس-منتن برای سوبسترای BAPNA به ترتیب 9958/2 میکرومول بر میلی گرم در دقیقه و 5350/0 میلی مول محاسبه گردید و Kcat نیز S^-1 2568/6 بدست آمد. نیمه عمر تریپسین روده ماهی سفید نیز با استفاده از تبدیل نمودار فعالیت آنزیم (بر حسب دقیقه) به نمودار لگاریتم طبیعی و محاسبه شیب آن، برابر با 72/58 دقیقه برای سوبسترای BAPNA محاسبه شد. نتایج نشان داد که تریپسین روده ماهی سفیدبا سهولت و هزینه ی کم قابل جداسازی و خالص سازی است و از لحاظ سینتیکی کارایی بالاتری نسبت به تریپسین تجاری (خوک) دارد و قابلیت استفاده در صنایع غذایی، صنایع شیلات، تهیه محیط کشت میکروبی و همچنین کاربرد درتحقیقات بیوتکنولوژی را دارد.