معرفی نشانگرهای ژنتیکی برای شناسایی و جداسازی پنج گونه از خانواده کپور ماهیان دریای خزر به روش PCR-PFLPs

Abstract

<br /> <br /> <br /> <br /> در این تحقیق 15 نمونه ماهی سفید Rutilus frisii kutum (kamensky، 1901)، 10 نمونه سس ماهی بزرگ سر Barbus capito (Gueldenstaedti، 1772)، 10 نمونه ماهی سیم Abramis brama (Linnaeus، 1785)، 10 نمونه ماهی ماش Aspius aspius (Linnaeus، 1758) و 15 نمونه باله ماهی کلمه Rutilus rutilus caspicus در مکانهای صید تجاری و در تیوپ های 500 میکرولیتری جمع آوری گردید. DNA کلی این نمونه ها به روش فنل کلروفرم (Hillis & Moritz، 1990) استخراج شدند و با استفاده از یک جفت پرایمر (جلودار) دارای توالی نوکلئوتیدهای ژن سیتوکروم b ماهی کلمه به روش PCR ازدیاد پیدا کردند.<br />جهت آنالیز RFLPs، محصول PCR ژن سیتوکروم (1117bp) b هر یک از نمونه های ماهی، با پنج آنزیم محدودالاثر (DNAasa) در دمای مناسب انکوباسیون، هضم گردیدند. باندهای DNA، با الکتروفورز عمودی در ژل پلی اکریلاماید و رنگ آمیزی نیترات نقره آشکار گردیدند و مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. پنج آنزیم Hinf I، Hinc II، Hha I، RsaI و Mbo I الگوهای پلی مورفیسم در بین برخی گونه ها نشان دادند که در نتیجه ژنوتیپ های ناشی از هضم آنزیمی از 4 آنزیم Hinf I، Mbo I، Hha I و Rsa I هاپلوتیپ های AAAA را برای سس بزرگ سر، BBBB برای کلمه، CCCC برای سیم و EEEE را برای ماهی سفید نشان دادند که هر یک از این هاپلوتیپ ها برای هر یک از این گونه ها دارای اهمیت نشانگر ژنتیکی گونه ای می باشد و برای تمایز این گونه ها دارای ارزش می باشند.