شناسایی بیماری لکه سفید WSSD) White Spot Syndrome Disease) با روش(Polymerase Chain Reaction (PCR در میگوی سفید هندی (Penaeus indicus) در ایران

Abstract

<br /> <br /> <br /> <br /> در تابستان سال 1381 مرگ و میر شدیدی در میگوهای پرورشی گونه سفید هندی(Penaeus indicus) در منطقه چوئیبده آبادان به وقوع پیوست. در میگوهای بیمار علایمی شامل وجود لکه های سفید به انداز 0.5 تا 2 میلیمتر بر روی کاراپاس، جدا شدن سریع کوتیکول از لایه اپیدرم، خالی بودن معده و روده، بزرگ، زرد و شکننده شدن هپاتوپانکراس و قرمز شدن اندامهای حرکتی مشاهده گردید. با توجه به مرگ و میر شدید میگوها و علایم کلینیکی مشاهده شده، نمونه ها مشکوک به بیماری لکه سفید یا White Spot Syndrome Disease بودند. به منظور تشخیص قطعی بیماری علاوه بر مشاهده علایم کلینیکی، روش تشخیص PCR با استفاده از کیت شناسایی بیماری لکه سفید به نام Single. Tube Nested DNA Amplification Kit- for Detection WSSD مورد استفاده قرار گرفت. نود نمونه از استخرهای پرورشی که مرگ و میر در آنها مشاهده شده بود از منطقه چوئیبده آبادان و یک صد و بیست نمونه از استانهای بوشهر، هرمزگان و منطقه گمیشان که میگوها سالم و مرگ و میر گزارش نشده بود جمع آوری و در الکل 90 درصد تثبیت شدند.DNA نمونه ها به روش ارایه شده در کیت و روش فنل و کلروفرم استخراج شد. برای مشاهده کیفیت و کمیت DNA در ژل آگارز (1 درصد) الکتروفورز شدند. با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ویروس WSSD موجود در کیت، PCR طبق دستور العمل شرکت سازنده با استفاده از دستگاه ترموسایکلر (مدل Corbet reseach) انجام پذیرفت. محصولات PCR نمونه ها با ژل آگارز 2 درصد الکتروفورز شدند. در نمونه های چوئیبده آبادان باندهای DNA که در ژل ظاهر شدند دارای اندازه های 356bp و 403bp بودند که مطابق دستورالعمل و پیش بینی شرکت سازنده کیت، موارد مثبت وجود بیماری لکه سفید را تایید می کند. در نمونه های سایر مناطق باندهای DNA که در ژل ظاهر شدند دارای اندازه های 232bp بودند که از نظر وجود بیماری لکه سفید منفی گزارش می شود.