بیان پروتئین M2 ویروس آنفلوانزای انسانی H1N1 در باکتری اشریشیا کلی

Abstract

مقدمه: پروتئین M2 كه یك پروتئین هوموتترامر متصل به غشا با پیوند دی‌سولفیدی می‌‌باشد، در میان همه‌ی ویروس‌های آنفلوانزای A به طور كامل حفاظت شده است. به همین دلیل هدف مناسبی برای توسعه‌ی واكسن آنفلوانزا با محافظت وسیع‌الطیف می‌باشد. در این مطالعه پروتئین M2 ویروس آنفلوانزای A در سیستم پروكاریوتی بیان شد. روش‌ها: ژن پروتئین M2 ویروس آنفلوانزا [A/NewCaledonia/20/99 (H1N1)] پس از تكثیر به روش PCR (Polymerase chain reaction) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و هضم آنزیمی، در وكتور بیانی پروكاریوتی pQE30 جای‌سازی گردید. پلاسمید نوتركیب pQE30-M2 به سلول مستعد‌ شده E.coli سویه‌ی M15 منتقل شد و سلول‌ها در محیط LB مایع واجد آمپی‌سیلین و كانامایسین بعد از القا با IPTG (Isopropyl thiogalactoside) به صورت كشت شبانه رشد كردند. بیان پروتئین M2 به وسیله‌ی الكتروفورز روی ژل آكریل آمید و سپس Western blot تأیید شد. یافته‌ها: نتایج کلونی PCR و هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد كه ژن M2 در وكتور pQE30 به طور صحیح و در قاب خواندنی دنباله‌ی هیستیدینی كلون شد و تولید پروتئین نوتركیب با استفاده از آنتی‌بادی اختصاصی ضد پروتئین M2 به روش Western blot تأیید گردید. نتیجه‌گیری: آزمایشات نشان داد كه واكسن‌های بر پایه‌ی M2 باعث القای ایمنی وسیع‌الطیف می‌شوند و می‌توانند حیوانات را در برابر چالش كشنده تحت تیپ‌های چند گانه‌ی ویروس، محافظت نماید. بنابراین پروتئین M2 پس از تخلیص می‌تواند به عنوان یك كاندید واكسن در نظر گرفته شود و در مطالعات آینده همراه با ادجوانت‌های مختلف در مدل‌های حیوانی مورد ارزیابی قرار گیرد. واژگان کلیدی: پروتئین M2، واکسن، بیان پروتئین، ویروس آنفلوانزا، اشریشیا کلی