مقایسه چهار کیت استخراج RNA تجاری به منظور تشخیص ویروس ویرمی بهاره کپور معمولی (Spring Viraemia of Carp Virus)SVCV

Abstract

ویرمی بهاره کپور (SVC)، توسط ویروسی باRNA تک رشته ای منفی از خانواده رابدوویریده ایجاد می شود. ویروس SVCV عامل اصلی بیماری مسری ویرمی بهاره کپور در سرتاسر جهان بخصوص در ماهی کپور معمولی پراکنده است و در دیگر خانواده های ماهیان شامل اردک ماهیان ، کپور ماهیان دندانه دار ، خورشید ماهیان ، گربه ماهیان و آزاد ماهیان نیز سبب بیماری می گردد. در این مطالعه به منظور دستیابی به روشی مناسب برای استخراج RNA ویروسSVCV ، کارایی چهار کیت مختلف برای استخراج RNA از سویه 70/56 SVCV تکثیر یافته در کشت سلولی، مورد مقایسه قرار گرفتند. دو کیت بر اساس استفاده از روش ماده گوانیدین تیوسانات و فنل – کلروفرم (RNA Extraction IQ2000 ساخت تایوان و RNX-PLUS ساخت سیناژن، ایران) و دو کیت بر اساس روش ستونی ( تجاری Cinnapure (ساخت سیناژن، ایران) وHigh Pure RNA Isolation Kit (Roche، آلمان) جهت جداسازی RNA مورد استفاده قرار گرفتند. نتایج نشان داد که میزان غلظت RNA استخراج شده با کیت های Roche و Cinapure ( به ترتیب 76/31 و 21/16 میکروگرم بر میکرولیتر ) بیشتر از دو روش فنل – کلروفرم بوده است . همچنین بجز کیت IQ2000 kit دیگر کیت ها در RT-PCR باند bp480 بر روی ژل الکتروفورز را نشان دادند . همچنینRNA استخراج شده در روش کیت تجاریIQ2000 kit دارای غلظت کمتری بود . در نهایت در این تحقیق استخراجRNA با روش ستونی به مراتب از نظر خلوص و غلظت بهتر از روش های فنل – کلروفرم مشاهده گردید.