بهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه C-D نوترکیب باکتریورودوپسین

Abstract

<em>در بررسی حاضر، بخش </em><em>CD</em><em>از پروتئین باکتریورودوپسین </em><em>(BR)</em><em> در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت </em><em>BR</em><em>با در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی </em><em>pET21a</em><em>+</em><em> در محل ‌های برش </em><em>Nde I</em><em> و</em><em>Hind III</em><em> </em><em>کلون شده و تحت کنترل پیش‌بر </em><em>T7</em><em> با موفقیت بیان شد. پروتئین بیان شده با </em><em>SDS PAGE</em><em> تجزیه شد. اثر دما </em><em>(A)</em><em>، زمان القا </em><em>(B)</em><em>و زمان فرایند پس از القا </em><em>(C)</em><em> روی بازده ی میزان بیان پروتئین ( میزان فراورده بر واحد جرم خشک سلول) با استفاده از تجزیه ‌های جدول </em><em>Yates </em><em>غربال گری شد. سه عامل </em><em>A</em><em> ، </em><em>B</em><em> و </em><em>C</em><em> مهم بودند و با روش تاگوچی بهینه شدند. شرایط بهینه عبارتند از: دما </em><em>^o</em><em>C</em><em> 37، زمان القا در 7_/0</em><em>OD₆₀₀</em><em>=</em><em> و زمان فرایند </em><em>پس از القا 4 ساعت. همچنین، تولید پیش‌ بینی شده پروتئین در شرایط بهینه، 54_/21%</em><em> </em><em>از کل پروتئین سلولی بود. با استفاده از شرایط بهینه به دست آمده، تأثیر افزودن اسیدهای آمینه روی میزان بیان بخش </em><em>CD</em><em> و ترکیب باکتریورودوپسین و رشد باکتری در اشرشیاکولی با استفاده از محیط کشت </em><em>M9 </em><em>مورد بررسی قرار گرفت. تجزیه و تحلیل جدول </em><em>Yates</em><em>نشان داد که اسیدهای آمینه آلانین، ترئونین و لیوسین دارای اثر بیشتری روی بیان پروتئین بودند و برای افزودن به محیط کشت در فرمانتور در دو سطح گوناگون انتخاب شدند. نتیجه‌ ها نشان دادند که افزودن اسیدهای آمینه باعث افزایش بازده ی تولید پروتئین مورد نظر می‌ شود، اما تأثیر ناچیزی روی رشد باکتری دارد.</em>