کلونینگ و بررسی بیان ژن کد‌کننده کاتپسین L کنه ریپی‌سفالوس آنولاتوس

Abstract

زمینۀ مطالعه: کنه‌ها از مهم‌ترین انگل‌های خارجی می‌باشند که باعث ایجاد زیان اقتصادی فراوانی در صنعت دامپروری می‌شوند. لذا تلاش در جهت حذف یا کاهش آن‌ها بر روی دام‌ها بسیار ضروری می‌باشد. سیستئین پروتئازها از جمله ترکیباتی هستند که نقش مهمی را در اعمال فیزیولوژیک کنه‌ها بر عهده دارند و کاندید مناسبی برای دست یابی به واکسن ضد کنه می‌باشند. کاتپسین‌ها یکی از مهم‌ترین سیستئین پروتئاز‌ها می‌باشند.<br /> هدف: هدف از این مطالعه، کلونینگ و بیان قطعه ژنی کاتپسین L کنه <em>ریپی‌سفالوس آنولاتوس</em> به‌منظور بررسی ایمنوژنیسیتی آن بوده است.<br /> روش‌کار: پس از جمع‌آوری کنه‌ها و تشخیص جنس و گونه آن‌ها اقدام به کشت کنه‌ها گردید. سپس استخراج RNA از نوزاد کنه‌ها، سنتز cDNA با استفاده از پرایمر اختصاصی کاتپسین و تکثیر آن با روش RT-PCR انجام پذیرفت. قطعه ژنی موردنظر در پلاسمید بیانی pQE30 کلون شد. در ادامه توالی کوتاه‌تری از ژن کاتپسین (654 جفت باز) نیز بصورت پلاسمید صناعی تهیه گردید. بیان پروتئین حاصل از هر دو پلاسمید نوترکیب در سیستم بیان پروکاریوتی <em>E.Coli</em>BL21 انجام و ایمنی‌زایی پروتئین‌های نوترکیب حاصل از آن با روش‌های سرولوژیک دات بلات و وسترن بلات در مواجهه با سرم خرگوش‌های چالش‌یافته با این پروتئین‌ها و گوساله‌های آلوده به کنه مورد بررسی و مقایسه قرار گرفت.<br /> نتایج: نتایج مطالعه حاضر نشان داد پروتئین حاصل از پلاسمید نوترکیب صناعی به دلیل حلالیت بیشتر بیان و تخلیص بالاتری داشت. همچنین سرم خرگوش چالش‌یافته با این پروتئین‌ها، قابلیت شناسایی هر دو پروتئین نوترکیب را داشت. اما شدت واکنش سرم گوساله‌های آلوده به کنه با پروتئین‌های نوترکیب تولید شده کمتر بود.<br /> نتیجه‌گیری نهایی: هر چند شدت واکنش سرم گوساله‌های آلوده به کنه با پروتئین‌های نوترکیب در مقایسه با سرم خرگوش کمتر بود، اما این امر با توجه به پنهان بودن آنتی‌ژن کاتپسین در روده کنه دور از ذهن نبود. در مجموع پروتئین نوترکیب کاتپسین ال می‌تواند به عنوان یک گزینه مناسب در جهت ایمن‌سازی گوساله علیه آلودگی به کنه <em>ریپی سفالوس آنولاتوس</em> به کار رود، هر چند بررسی‌های بیشتر در این زمینه ضروری به نظر می‌رسد.