تعیین کمترین عیار سرمی با ارزش جهت تشخیص توکسوپلاسموز گوسفند در روشهای الایزا، ایمونوفلورسنت و وسترت بلات

Abstract

هدف: تعیین کمترین عیار با ارزش آنتی بادی ضد توکسوپلاسماگوندی آی در تشخیص آلودگی گوسفند، در الایزای غیر مستقیم و IFA، با استفاده از آنتی ژن محلول SAG-1 دروسترن بلات، به عنوان یک پروتئین مشخص کننده عفونت. حیوانات: یکصدوده راس گوسفند بومی بالغ از 14 گله در اطراف ارومیه. روش: جدا نمودن سرم و تعیین آخر رقت مثبت هر سرم با آزمونهای IFA، والایزا انجام شد و آخرین رقت مثبت هر سرم با آنتی ژن محلول SAG-1 در وسترن بلات، جهت تعیین کمترین عیار با ارزش در IFA والایزا مورد بررسی قرار گرفت. در IFA، لکه های آنتی ژن با استفاده از تاکی زوئیت انگل تهیه و رقت های 1:20 تا 1:640 سرم روی آن ریخته و سپس در معرض کنژوگه فلورسئیس قرار گرفت و آخرین رقت مثبت ثبت گردید. در الایزا پلیت با 105 تاکی زوئیت در هر حفره پوشش دار گردید و رقت های 1:50 و 1:100 سرم روی آن ریخته و تحت تاثیر کنژوگه پراکسیداز قرار گرفت و فعالیت آنزیمی هر حفره در 492 نانومتر ثبت گردید. نمونه های سرم که SAV آنها مساوی یا بزرگتر از 5/2 برابر SAV سرمهای کنترل منفی بود، مثبت در نظر گرفته شد. وسترن بلات با استفاده از آنتی ژن محمول کامل و SAV-1 تجاری و تاثیر آخرین رقت مثبت از هر سرم روی آن انجام شد. جهت مریی شدن واکنش هر سرم با باند 30 کیلو دالتون، نوارها را در کنژوگه پراکسیداز گذاشته و مریی شدن باند مورد بررسی قرار گرفت. داده های به دست آمده از 110 سرم با IFA والایزا به منظور تعیین درصد همخوانی مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت. تجزیه و تحلیل آماری: از آزمون آماری مربع کاری جهت پی بردن به اختلاف معنادار بین نتایج الایزا و IFA استفاده شد. نتایج: از 110 نمونه سرم ، 24 مورد ( 8/21 درصد ) با هر دو تست الایزا و IFA مثبت شدند. تمامی 24 مورد سرم مثبت با هر دو آزمون، دروسترن بلات واکنش مریی قوی با باند SAG-1 نشان دادند. پنج مورد که الایزا مثبت ( عیار 1:50 ) و IFA منفی بوده و نیز 2 مورد IFA مثبت ( عیار 1:20 ) که الایزا منفی بودند، دروسترن بلات نیز واکنش مریی مشاهده نگردید. نتیجه گیری: با توجه به یافته های الایزا و IFA و نتایج وسترن بلات میزان آلودگی گوسفندان بالغ به توکسوپلاسموز 8/21 درصد به دست آمد. در این مطالعه همچنین نشان داده شد که بین داده های به دست آمده از الایزا و IFA درصد همخوانی وجود دارد. کمترین عیار با ارزش جهت تشخیص آلودگی با توکسوپلاسماگوندی آی در IFA 1:40 و در الایزا 1:100 به دست آمد. مجله دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، 1384، دوره 60، شماره 3، 223-219.