شناسایی گونه های مختلف آیمریاهای جدا شده از طیور ایران به وسیله واکنش زنجیر پلیمراز (PCR)

Abstract

هدف : شناسایی و تفکیک گونه‌های مختلف آیمریاهای طیور ایران با استفاده از روش (PCR). طرح : استفاده از نرم‌افزار آنالیز جمعیتهای ژنتیکی جهت تعیین ضریب شباهت. حیوانات: واحدهای مرغداری مرغ مادر، از 5 منطقه آب و هوایی ایران که واکسن کوکسیدیوز استفاده نکرده بودند، جهت نمونه‌برداری انتخاب و تعداد 114 نمونه بستر به طور تصادفی از این مرغداریها تهیه شد. روش اواوسیست‌های موجود در نمونه‌ها به روش شناورسازی جدا و DNA آنها به وسیله قتل کلروفروم و با استفاده از پروتئیناز K استخراج شد. برای شناساییو تفکیک گونه‌های مختلف آیمریا از چهار جفت پرایمر اختصاصی طراحی شده از سکانس ناحیه DNA,Internal transcribed spacer-1(ITS1) ریبوزومی آیمریاآسروولینا، آیمریا برونتی، آیمریانکاتریکس و آیمریاتنلا و یک جفت پرایمر یونیورسال BSEF-BSER که ناحیه ITS1 گونه‌های مختلف آیمریاها را تکثیر می‌کند استفاده شد. نتایج : DNA ژنوم اواوسیست‌های جدا شده از مدفوع طیور آلوده با پرایمرهای اختصاصی توسط واکنش زنجیر پلیمراز تکثیر و بر حسب نوع گونه آیمریا یک قطعه DNA در اندازه 320 جفت باز (آیمریا آسروولینا)، 311 جفت باز (آیمریابرونتی)، 384 جفت باز (آیمریانکاتریکس ) و 287 جفت باز (آیمریاتنلا) بر روی ژل آگارز حاوی اتیدیوم بروماید مشاهده شد. برای شناسایی گونه‌ها در نمونه‌هایی که آلودگی مخلوط داشتند و گونه‌های خالصی که برای آنها جفت پرایمر اختصاصی وجود نداشت از جفت پرایمر یونیورسال استفاده شد. در این بررسی 5 گونه آیمریا ماکزیما، آیمریابرونتی، آیمریاتنلا، آیمریاآسروولینا و آیمریامیتیس شناسایی شدند که شناسایی و گزارش آیمریامیتیس و آیمریابرونتی برای اولین بار در ایران در این بررسی صورت گرفته است. نتیجه‌گیری : در پایان با توجه به نتایج به دست آمده جفت پرایمرها معرفی شده کاملا اختصاصی عمل نمودند و جفت پرایمر یونیور سال نیز توانست 5 گونه ایمریا را در نمونه‌های آلوده و همچنین نمونه‌هایی که برای آنها جفت پرایمر اختصاصیز وجود نداشت را از یکدیگر تفکیک و مورد شناسایی قرار دهد. بنابراین تشخیص گونه‌های آیمریا با روش (PCR) یک روش بسیار سریع، دقیق، آسان و ارزان است و نیاز به خالص سازش و تکثیر ندارد پیشنهاد می‌گردد این روش به عنوان یک روش روزمره در آزمایشگاه‌های کشور که امکانات لازم را دارند مورد استفاده قرار گیرد.