همسان‌سازی، تعیین توالی و بیان بخش C ترمینال پروتئین شوک حرارتی 70 ‌(HSP70 )مایکوباکتریوم آویوم تحت گونه پاراتوبرکلوزیس

Abstract

پروتئین‌های شوک حرارتی (HSPs) در نقش کمک ایمنی باعث افزایش توان پاسخ دستگاه ایمنی ذاتی و اختصاصی بدن نسبت به آنتی ژن‌های مختلـف بـه خصوص آنتی ژن‌های توموری و آنتی ژن‌های عوامل عفونی مختلف می‌شوند. بخش C ترمینال پروتئین شوک حرارتی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در کنار آنتی ژن‌های پروتئینی ساختاری قدرتمند برای تحریک پاسخ‌های ایمنی فراهم می‌آورد. در مورد پروتئین شوک حرارتی 70 متعلق به گونه پاراتوبرکلوزیس و نقش آن در تحریک سیستم ایمنی مطالعات چندانی صورت نگرفته است، اما به نظر می‌رسد در ساختار واکسن DNA هم‌چون توبرکلوزیس از توانایی‌های بالایی برخوردار باشد. در این مطالعه پلاسمید اوکاریوتی ‌1pEGFP-N حاوی قسمت C ترمینال پروتئین شوک حرارتی مایکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس طراحی و ساخته شد. در این پلاسمید از ژن پروتئین سبز درخشان در کنار ژن هدف برای تأیید بیان و بررسی کارایی پلاسمید استفاده گردید. صحت توالی نوکلئوتیدی قطعه همسان‌سازی شده در پلاسمید مزبور با روش تعیین توالی مشخص شد.همچنین بیان پروتئین حاصل از پلاسمید طراحی شده در کشت سلول ‌7COS-‌ با رونوشت برداری معکوس به اثبات رسید . نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که پلاسمید بیان شونده اوکاریوتی ‌1pEGFP-N حاوی قطعه C ترمینال ژن پروتئین شوک حرارتی مایکوباکتریوم آویوم تحت گونه پاراتوبرکلوزیس به خوبی قابلیت بیان در کشت سلول‌ 7COS-‌ را دارد. این پلاسمید را می‌توان به‌عنوان یک محمل در تهیه واکسن‌های DNA واجد قطعه C ترمینال پروتئین شوک حرارتی 70 مایکوباکتریوم آویوم تحت گونه پاراتوبرکلوزیس به کار برد. ‌ ‌