.بررسی پروفایل پروتئوم و شناسایی برخی پروتئینهای کنه بوفیلوس آنولاتوس(سویه مازندران)

Abstract

مقدمه: ریپی‌سفالوس (بوافیلوس) آنولاتوس یک کنه تک میزبانه است که قادر به انتقال انگل‌ها و باکتری‌ها به گاو، آسیب به چرم، کاهش رشد و گاهی فلجی می‌باشد. لذا آلودگی به این کنه‌ها می‌تواند به عنوان یک مشکل عمده در صنعت دامپروری محسوب گردد. روش‌های کنترلی مختلف از جمله روش‌های شیمیایی جهت مبارزه با کنه‌ها استفاده می‌شود اما بدلیل ایجاد مقاومت به درمان شیمیایی، محققان در تلاش برای یافتن برخی پروتئین‌های ایمونوژن جهت تولید واکسن می‌باشند. بررسی پروتئین‌های این کنه، می‌تواند گامی مهم در شناخت بیشتر مولکول‌های بیولوژیک، جهت توسعه استراتژی‌های کنترل باشد. هدف از مطالعه حاضر ارزیابی پروتئین‌های لارو ریپی‌سفالوس ( بوافیلوس) آنولاتوس با الکتروفورز دوبعدی و شناسایی برخی پروتئین‌های ایمونوژن آن با وسترن بلاتینگ دوبعدی و اسپکترومتری جرمی MALDI TOF/TOF مربوط به سویه‌ی مازندران می‌باشد.<br /> مواد و روش‌ها: جهت انجام این پژوهش اقدام به کشت کنه، انجام الکتروفورز یک بعدی و دو بعدی، وسترن بلاتینگ و اسپکترومتری جرمی گردید و نتایج به دست آمده با کمک نرم افزار Mascot مورد آنالیز قرار گرفت.<br /> نتایج: درآنالیز تصویر دوبعدی به دست آمده از الکتروفورز دوبعدی، تقریبا 80 نقطه پروتئینی با وزن مولکولی و نقطه ایزوالکتربک (PI) متفاوت با رنگ آمیزی کوماسی بلو شناسایی شد. همچنین بر اساس دو فاکتور ایمنی زایی (براساس آزمون وسترن بلات) و بالا بودن غلظت ، 10نقطه پروتئینی (با وزن مولکولی بین14 و 97 کیلو دالتون) برای انجام اسپکترومتری جرمی MALDI TOF و MALDI TOF-TOF MS انتخاب گردید. از بین این 10 نقطه، پروتئین های وتیلوژنین، پیش ساز وتیلوژنین ، تروپومیوزین، و پروتئین فرضی ISCW001652 به عنوان پروتئین‌های با خاصیت ایمنی-زایی شناسایی شدند. همچنین آنالیز محتوای عصاره نشان داد برخی پروتئین‌ها از جمله وتیلوژنین در محلول عصاره پروتئینی لارو دارای ایزوفرم‌های مختلفی هستند.<br /> بحث: نتایج مطالعه حاضر می تواند گامی نخست در جهت انتخاب پروتئین‌های کاندید برای ساخت و توسعه واکسن‌های ضد کنه باشد.