اثر تعداد سلولهای گرانولوزا در محیط کشت در بیان ژن آنزیمهای مؤثر در ساخت هورمونهای استروییدی

Abstract

زمینه مطالعه: سلول‌های گرانولوزا دارای نقشی کلیدی در مسیر استروئیدوژنسیز هستند. هدف: از مطالعه حاضر بررسی تراکم سلول‌های گرانولوزا کشت داده شده حاصل از فولیکول‌های mm 5-2بر تراوش استرادیول و بیان ژن‌های مرتبط با ساخت استرادیول و پروژسترون بود. روش کار: به طور خلاصه، فولیکول‌های mm 5-2 از تخمدان گاوهای بالغ از کشتارگاه جمع آوری شدند، پس از جدا سازی و شمارش سلول‌ها با استفاده از رنگ تریپان بلو 4/0‌%، سلول‌های گرانولوزا در محیط DMEM/F12 به مدت شش روز کشت داده شدند. تیمارها شامل 1) 500 هزار سلول در mL‌500 محیط کشت، 2) 500 هزار سلول در mL 200 محیط کشت، 3) 250 هزار سلول در mL‌500 محیط کشت و 4) 250 هزار سلول در mL‌200 محیط کشت بود. داده‌های مربوط به بیان ژن‌ها با استفاده از نرم افزار JMP مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. نتایج: در شرایطی که مقدار محیط کشت ثابت بود کاهش تعداد سلول‌ها (کاهش تراکم) منجر به افزایش غلظت استرادیول گردید و در شرایطی که تعداد سلول‌ها ثابت بود کاهش محیط کشت (افزایش تراکم) سبب کاهش غلظت استرادیول گردید. میزان پروتئین و RNA استخراجی تفاوتی بین تیمارها نداشت. با کاهش تراکم بیان ژن‌های FSHR، CYP19، 17βHSD افزایش و بیان ژن‌های GADD45β و StAR کاهش یافت. نتایج مطالعه حاضر نشان داد کاهش تراکم سلول سبب افزایش تولید استرادیول و همچنین افزایش mRNA کد کننده آنزیم‌های استروژنیک گردید ولی بالعکس سبب کاهش بیان mRNA کد کننده آنزیم‌های پروژستژنیک (Progestagenic) گردید. نتیجه‌گیری‌نهایی: غلظت پروتئین با کاهش تراکم سلول تغییر نکرد در نتیجه می‌توان سلول را از اثرات مضر افزایش تراکم محافظت کرد.