طراحی یک روش سریع برای تشخیص کیست هیداتیک در گوسفند

Abstract

زمینه مطالعه: استفاده از یک آزمون سریع و مقرون بصرفه برای تشخیص هیداتیدوز بعنوان بیماری مشترک بین انسان و حیوان می‌تواند بسیار مفید باشد. هدف: هدف از بررسی حاضر طراحی و بکارگیری نوعی روش سریع در تشخیص هداتیدوز بوده است. روش کار: ‌دو نوع آنتی‌ژن مایع خام و آنتـی‌ژن همـوژنیـزه پـروتـواسکـولکس تهیه و الگوی الکتروفورتیک آنها توسط الکتروفورز با سدیم دودسیل سولفات تعیین شد. برای تهیه سرم هیپرایمیون از خرگوش بعنوان حیوان آزمایشگاهی استفاده گردید. سرم‌های ایمن بعد از تهیه توسط الایزا‌نقطه‌ای آزمایش شدند. جهت انجام روش ‌Dipstick‌ از کاغذ نیتروسلولز بعنوان بستر استقرار آنتی‌ژن‌ها استفاده شد و لکه‌گذاری آنتی‌ژن در بخش بالایی نوارهای کاغذی انجام گرفت. از فسفات بافرسالین و سرم خرگوش بترتیب بعنوان کنترل منفی و نرمال استفاده شد. هر نوار بطور مجزا در سرم تحت آزمایش (به نسبت 100/1) بمدت هفت دقیقه قرار گرفت و بعد از شست‌وشو برای هفت دقیقه به آنتی‌بادی گونژوکه انتقال یافت. در پایان نوار برای 2 دقیقه به سوبسترای دی‌آمینوبنزیدین منتقل شد و نتیجه با رنگی شدن محل استقرار آنتی‌ژن مشخص گردید. نتایج: ‌بررسی نتایج الگوی الکتروفورتیک دو آنتی‌ژن تهیه شده از کیست هیداتیک نشان داد در آنتی‌ژن مایع خام کیست 15 باند پروتئینی با وزن مولکولی kDa29 تا 130 و در الکتروفورز آنتی‌ژن پروتواسکولکس 9 باند با وزن مولکولی kDa25 تا 90 وجود دارد. در طراحی روش سریع برای شناسایی سرم‌های ایمن بهترین نتیجه با رقت سرمی 100/1 و از نظر آنتی‌ژن غلظت 10/1 برای آنتی‌ژن پروتواسکولکس و غلظت 20/1 برای آنتی‌ژن مایع دیده شد. نتیجه‌گیری‌نهایی: می‌توان از آزمون سریع ‌Dipstick‌ بعنوان یک روش ایمونولوژیک مناسب در تشخیص بیماری هیداتید استفاده کرد، با این وجود بمنظور افزایش ویژگی آزمون تحقیقات بیشتری در مورد بهره گیری از آنتی ژن‌های اختصاصثی باید انجام پذیرد.