بکارگیری تکنیک نوین ترکیب PCR کمی با پروپیدیوم مونوآزید جهت شمارش استافیلوکوکوس اورئوس انتروتوکسیژنیک در محصولات خامه‌ای قنادی

Abstract

زمینۀ مطالعه: <em>استافیلوکوکوس اورئوس</em> یکی از پاتوژن­های مهم انسانی است که عامل بروز عفونت بوده و نیز با تولید انواع مختلف انتروتوکسین­ها موجب مسمومیت­های غذایی می­گردد. استفاده از روش­های معمول کشت جهت شمارش <em>استافیلوکوکوس اورئوس</em> دارای محدودیت­هایی مانند مدت زمان طولانی برای رشد باکتری و فقدان حساسیت و دقت لازم در مورد سلول­های زنده غیر­قابل کشت می­باشد.<br /> هدف: هدف از انجام این پژوهش جستجو و شمارش <em>استافیلوکوکوس اورئوس</em> تولید کننده انتروتوکسین­های A-E در محصولات خامه­ای قنادی با استفاده از روش PCR زمان واقعی در ترکیب با پروپیدیوم مونوآزید (PMA) جهت تفکیک سلول­های زنده از مرده بود.<br /> روش‌کار: تعداد 100 نمونه شیرینی خامه­ای به مدت 2 ماه و به صورت تصادفی از کارگاه­های قنادی شهر آمل تهیه شد. پس از تهیه رقت از نمونه، پلت­های باکتریایی جداسازی و قبل از استخراجDNA ، با PMA تیمار شدند. PCR زمان واقعی جهت شمارش کل سلول­های <em>استافیلوکوکوس اورئوس</em> و نیز سویه­های انتروتوکسیژنیک آن با استفاده از پرایمرهای اختصاصی انجام شد.<br /> نتایج: نتایج شمارش کشت معمولی به نتایج PMA-qPCR بسیار نزدیک بود (05/0<<em>P</em>)، لیکن داده­های به دست آمده از qPCR که مجموع سلول­های مرده و زنده را شمارش می­نماید از نتایج دو روش دیگر تعداد بیشتری باکتری را نشان داد. حساسیت روش به کار رفته در این مطالعه جهت جستجوی تعداد اندک <em>استافیلوکوکوس اورئوس </em>(کمتر از 10سلول در گرم) قابل ملاحظه به نظر می­رسد.<br /> نتیجه‌گیری نهایی: یافته­ها نشان داد که استفاده از PCR در ترکیب با PMAنتایج قابل اعتماد­­تری نسبت به روش معمولی کشت حاصل می­نماید. با توجه به مدت زمان کوتاه حصول نتایج، اختصاصی بودن و حساسیت قابل ملاحظه این روش امید است در آینده نزدیک در آزمایشگاه­های کنترل کیفیت مواد غذایی دستگاه­های نظارتی به کار گرفته شود.