تمییز آلل‏ های MHC سگ (DLA-DRB1) با روش تحلیل دقیق دمای شکافت DNA

Abstract

زمینه مطالعه: نقش مهم مولکول‏های مجتمع عمده پذیرش بافتی (MHC) اتصال به پپتید‌های پادگنی و عرضه آن‌ها به لنفوسیت‏های T است. از اینرو تنوع MHC با حساسیت و یا مقاومت در برابر بسیاری از بیماری‏های عفونی و بیماری های خودایمن مرتبط است. یک روش نوین بررسی تنوع ژنتیکی، تحلیل دقیق دمای شکافت (HRM-High Resolution Melting) DNA است که می توان آنرا برای بررسی تنوع MHC به کار برد. هدف: تمییز آلل‏ های MHC سگ (DLA-DRB1) با روش تحلیل دقیق دمای شکافت DNA روش کار: تعداد 40 نمونه خون از سگ های ارجاعی به بیمارستان دام‏های کوچک دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران جمع آوری گردید. پس از استخراج DNA و افزوده سازی اگزون دوم ژن DLA-DRB1، تحلیل HRM و منحنی ذوب صورت گرفت. برای تطبیق الگوهای HRM با توالی نوکلئوتیدی آلل ها، از روش تعیین توالی مستقیم استفاده شد. نتایج: بر اساس تنوع مشاهده شده در نتایج HRM و منحنی ذوب، 40 نمونه به 8 ژنوتیپ (A تا H) قابل تقسیم‏بندی بودند. بیشترین فراوانی مربوط به تیپ A (00/25 %) و سپس تیپ C و E (هر کدام 00/15 %) بود. در مجموع 5/82 % نمونه ها هتروزیگوت و 5/17 % نمونه ها هوموزیگوت بودند. نتیجه گیری: مطالعه حاضر اولین مطالعه‏ای است که برای تایپیگ آلل‏های ژن DLA-DRB1 از تکنیک HRM استفاده شده است. تطبیق نتایج HRM با توالی آلل ها نشان داد که این روش می‏تواند برای تفکیک آلل‏های DLA-DRB1 به کار رود.