مطالعه کاتپسین‌های مرتبط با هضم هموگلوبین و ویتلین در نوزاد کنه ری پی سفالوس (بوافیلوس) آنولاتوس‌ ‌به روش زایموگرافی یک بعدی و دوبعدی

Abstract

زمینه مطالعه:‌ بیوشیمی هضم پروتئین‌ها در کنه‌ها یک فرآیند پیچیده است و مطالعات پروتئومیکس عملکردی که بیانگر نقش آنزیم‌های پروتئولیتیک است می‌تواند در ارتباط با انتخاب این آنزیم‌ها بعنوان واکسن مفید واقع شود. تبدیل پروتئین‌های خون از جمله هموگلوبین به ویتلین در کنه‌های بالغ ماده صورت می‌گیرد. همچنین هضم ویتلین در تخم و لارو کنه‌های خون نخورده در جهت تأمین اسید آمینه و انرژی، از فرآیندهای مهم و حیاتی در روند تکاملی کنه‌ها می‌باشد. مطالعات متعدد، حاکی از وجود شبکه ای از آنزیم‌های پروتئولیتیک در رابطه با هضم هموگلوبین و ویتلین می‌باشد. این آنزیم‌ها در اغلب موارد مربوط به سیستئین پپتیدازها و آسپارتیک پپتیدازها می‌باشند. هدف:‌ ‌هدف از این مطالعه، بررسی کاتپسین‌ها در عصاره لارو کنه ری پی سفالوس ( بوافیلوس) آنولاتوس، بوده است. روش کار:‌ ‌در این تحقیق، با اضافه نمودن هموگلوبین و ژلاتین به ژل آکریل آمید و با روش زایموگرافی یک بعدی و دو بعدی، به بررسی کاتپسین‌ها در عصاره لارو کنه ری پی سفالوس (بوافیلوس) آنولاتوس، پرداخته شد. نتایج :‌ ‌نتایج بدست آمده از زایموگرافی یک بعدی، نشان دهنده حضور یک باند حدود kDa‌ 28 بود. در زایموگرافی دوبعدی نیز نواحی شفاف در زمینه تیره ژل با وزن‌های مولکولی حدود kDa‌ 21 تا 65 و با ‌pH‌ ایزوالکتریک مختلف مربوط به کاتپسین‌ها، مشاهده شد. زمانی که DTT به بافر انکوباسیون (بافر استاتmM‌10 و 4 = ‌)pH اضافه گردید، فعالیت پروتئازی افزایش یافت که در زایموگرافی یک بعدی به صورت تشکیل باند شفاف واضح تر در مقایسه با نمونه‌های قرار گرفته در بافر فاقد ‌DTT‌ نمایان گردید. نتیجه‌گیری‌نهایی: با توجه به این که ‌pH‌ بافر انکوباسیون اسیدی بوده و با اضافه نمودن ‌DTT‌ فعالیت این آنزیم‌ها افزایش یافته است، لذا به‌نظر می‌رسد که برخی از این آنزیم‌های پروتئولیتیک مربوط به سیستئین پروتئازها بوده‌اند.