شناسایی و جداسازی وینبلاستین از جدایه قارچ اندوفیت Chaetomium globosum Cr95 جدا شده از گیاه Catharanthus roseus

Abstract

مقدمه: قارچهای اندوفیت توانایی تولید بسیاری از متابولیت های ثانویه گیاه را دارند و ترکیبات جدیدی را برای تحقیقات دارویی در دسترس قرار می دهند. در این تحقیق جدایه قارچ اندوفیتی Cr95 جدا شده از ساقه گیاه Catharanthus roseus برای بررسی تولید وینبلاستین مورد آزمایش قرار گرفت.<br /> مواد و روش ها:جدایه قارچی با استفاده از روش های مورفولوژیکی ، ملکولی و آنالیز فیلوژنتیکی شناسایی و گروه بندی شد. علاوه بر این، فعالیت ضد تکثیر سلولی جدایه ای C. globosumCr95 در برابر قارچ مدل P. oryzae ارزیابی شد. سپس برای بررسی تولید وینکا آلکالوئیدها با استفاده از تست های بیوشیمیایی ، بررسی تکثیر ژن تریپتوفان دکربوکسیلاز (TDC) و تجزیه و تحلیل TLC و HPLC مورد آزمایش قرار گرفت. همچنین فعالیت سیتوتوکسیک وینبلاستین خالص شده قارچ در برابر کنیدی های P. oryzae با استفاده از آزمون MTT بررسی شد.<br /> یافته ها: بر اساس بررسی های مورفولوژیکی و آنالیز فیلوژنی جدایه قارچی به عنوان گونه Chaetomium globosumشناسایی شد. بر اساس نتایج جدایه اندوفیتی دارای اثرات سیتوتوکسیک و ضد تکثیرسلولی قابل توجه و معنی داری بوده و همچنین در آزمایش های بیوشیمیایی جدایه C. globosumCr 95 نتیجه مثبت درتولید آلکالوئید وینکا را نشان داد. ژن TDC نیز در این جدایه تکثیرو ردیابی گردید. همچنین حضور وینبلاستین در فیلتراسیون کشت قارچ از طریق تجزیه و تحلیل های کروماتوگرافی و اسپکتروسکوپی تایید و مقدار آن 78 میلی گرم بر لیتر برآورد شد. فعالیت سیتوتوکسیک وینبلاستین خالص شده قارچ در برابر کنیدیای P. oryzae با مقدار IC50 برابر با5 میکروگرم در میلی لیتر بدست آمد.<br /> بحث و نتیجه گیری: حضور آلکالویید وین بلاستین در عصاره ی اتیل استاتی قارچ اندوفیت C. globosumCr95 با استفاده ازتکثیر ژن TDC و روش های کروماتوگرافی TLC و HPLC مشخص شد. این بررسی اولین گزارش از تولید وینبلاستین از قارچ اندوفیت. C. globosumCr 95 جدا شده از گیاه C. roseus می باشد.