بیان دو سیسترونی ژن‌های رمز کننده آنتی‌بادی مونوکلونال trastuzumab در توتون با استفاده از یک توالی جایگاه میانی ورود ریبوزوم

Abstract

آنتی‌بادی‌های مونوکلونال هترودایمرهای متشکل از چهار زنجیره پپتیدی، دو زنجیره سبک (L) یکسان و دو زنجیره سنگین (H) یکسان هستند. بیان همزمان مقدار برابر ژن‌های رمز کننده برای تولید پایدار و گردایش به صورت یک آنتی‌بادی کارکردی ضروری است. به منظور بیان هم‌زمان چندین ژن، سیستم‌های مختلفی از جمله وکتورهای مبتنی بر جایگاه میانی ورود ریبوزوم (IRES) توسعه یافته‌اند. در مطالعه حاضر، یک حامل دی‌سیسترونیک برای بیان هم‌زمان ژن‌های رمز کننده زنجیره‌های سنگین و سبک آنتی‌بادی ضد سرطان سینه trastuzumab (Herceptin®) با استفاده از توالی IRES از فاکتور پروتئین شوک حرارتی-1 Nicotiana tabacum (NtHSF1) ساخته شد. کارایی دستواره در Nicotina tabacum به روش آگرواینفیلتراسیون ارزیابی شد. بیان دی‌سیسترونیک تراژن‌ها در سطح رونوشت RNA با آنالیز RT-PCR نیمه کمّی مشخص شد. آنالیز وسترن بلات بیان کارآمد فرم تترامر trastuzumab را در بافت برگی توتون مورد تایید قرار داد و محتوی آنتی‌بادی 7 روز پس از اینفیلتراسیون 44/0 درصد پروتئین کل محلول برآورد شد. نتایج مطالعه حاضر نشان دهنده کارایی عناصر IRES گیاهی برای بیان دی‌سیسترونیک پروتئین‌های هترومولتی‌مر در گیاهان است.