بیان سازه دکامر لومازین سنتاز با منشأ ‏بروسلایی در سیستم بیانی پروکاریوتی

Abstract

لومازین سنتاز بروسلایی، آنزیم دخیل در بیوسنتز ریبوفلاوین، مرکب از 10 زیرواحد مشابه می‌باشد که به‌صورت کپسیدی تجمع می یابند. با توجه به کاربردهای وسیع لومازین سنتازها در زمینه‌های بیولوژی، تولید لومازین سنتاز در مقیاس بالا و خالص‌سازی کارآمد آن ضروری می‌نماید. در مطالعه حاضر، ساختار اولیه لومازین سنتاز بروسلا ملی‌تنسیس از پایگاه داده NCBI دریافت گردید. توالی لومازین سنتاز ابتدا با استفاده از واکنش‌های زنجیره‌ای پلیمراز تکثیر گردید و سپس کلون و بیان گردید. بیان سازه با استفاده از پلازمید بیانی pET28a و در باکتری BL21 DE3 انجام گردید. برای حذف بقایای دیواره باکتری و خالص‌سازی پروتئین، از روش‌های رسوب‌دهی با آمونیوم سولفات و تکنیک‌های کروماتوگرافی تعویض یونی استفاده گردید. از آزمون‌های الیزا و وسترن بلات جهت تأیید بیان و مانیتورینگ مراحل استفاده گردید. خالص‌سازی لومازین سنتاز با استفاده از روش کروماتوگرافی با استفاده از سفادکس دی اتیل آمینو اتیل DEAE منجر به حصول باند یگانه در الکتروفورز با ژل پلی اکریلامید (SDS-PAGE) گردید. نتایج این بررسی نشان داد که روش‌های بهینه‌سازی بیان و خالص‌سازی مورد استفاده در این تحقیق، می‌تواند در تولید لومازین سنتاز نوترکیب بروسلایی خالص و در مقیاس بالا به‌عنوان یک محصول نوترکیب ارزشمند در تحقیقات واکسن استفاده گردد.