استفاده از نانو رشته‌های آمیلوئیدی به‌عنوان یک بستر پروتئینی برای تثبیت آنزیم لیپاز باکتری سودوموناس سپاسیا

Abstract

چکیده<br /> آمیلوئیدها در ­شرایط غیرطبیعی­کننده از پروتئین­های مختلف به­ وجود می­آیند. سطح بسیار فعال، این مواد را به­عنوان بستری برای تثبیت آنزیم مناسب می­سازد. هدف از ­این مطالعه تولید رشته­های آمیلوئیدی و بررسی امکان استفاده از آن­ها به­عنوان بستر برای تثبیت آنزیم بوده است. برای تولید حداکثر میزان آمیلوئید از روش پاسخ سطح¹ استفاده شد و نتایج طیف­ سنجی کنگورد و دورنگ­نمایی دورانی² با نرم­افزار Design Expert 7 (Trial version) تحلیل شد و از میکروسکوپ الکترونی گذاره برای تایید حضور رشته­های آمیلوئیدی استفاده گردید. فرایند تثبیت با گلوتارالدهید و با ایجاد پل­عرضی بین آنزیم و رشته­های آمیلوئیدی انجام شد و فاکتور­های سینتیکی در آنزیم آزاد و تثبیت­شده شامل فعالیت، فعایت ویژه، دما و pH بهینه و پایداری حرارتی باهم مقایسه شدند. بیش­ترین میزان آمیلوئید پس از 6/72 ساعت به­هم زدن آلبومین سرم گاوی با غلظت 35/4 میلی­گرم بر میلی­لیتر در بافر میکس سیترات-فسفات با 49/4=pH و دمای 80 درجه به­دست آمد و لیپاز تثبیت­شده در فعالیت، فعالیت ویژه، K_m و V_max، دما و pH بهینه و پایداری حرارتی در دمای 40 درجه نسبت به لیپاز آزاد برتری سینتیکی نشان داد. رشته­های آمیلوئیدی به­عنوان موادی غنی از گروه­های شیمیایی، می­توانند برای تثبیت آنزیم­ها مناسب باشند. این زمینه پروتئینی می‌تواند کاندیدای مناسبی در شرایط <em>inVivo</em> به­عنوان بستری زیست­سازگار در تثبیت آنزیم­ها باشد. آمیلوئیدها با قطر کمتر از 100 نانومتر به­عنوان نانو مواد جدید، نه­تنها باعث افزایش پایداری لیپاز می­شوند، بلکه سایر خواص سینتیکی آن را به­عنوان یک نانو-ماتریکس جدید تقویت می‌کنند.