تولید فاژهای پلی‏کلونال حاوی قطعات ژنی آنتی‏بادی اختصاصی باکتری Xanthomonas citri subsp. citri با استفاده از فن‏آوری نمایش فاژی

Abstract

شانکر باکتریایی مرکبات از بیماری‏های باغات لیمو در جنوب کشور با عامل <em>Xanthomonas</em> <em>citri</em> subsp. <em>citri</em>می‏باشد. تکنیک فاژنمایی از راهکارهای تولید آنتی‏بادی‏های اختصاصی به منظور شناسایی گیاهان آلوده و همچنین تولید گیاهان مقاوم به بیماری است. در این تحقیق قابلیت استفاده از این سیستم برای تولید فاژهای نوترکیب حاوی قطعات آنتی‏بادی اختصاصی برعلیه باکتری عامل بیماری شانکر مرکبات بررسی شد. برای این منظور، پروتئین‏ تاثیرکننده (pthA) و پیلوس (HrpE) که از اجزای اساسی سیستم ترشحی نوع سه باکتری هستند و نقش ضروری در بیماری‏زایی پاتوژن دارند، به عنوان آنتی‏ژن انتخاب شدند. ابتدا پروتئین‏های pthA و HrpE به صورت نوترکیب در میزبان باکتریایی تولید شدند و با روش کروموتوگرافی خالص گردیدند. از کتابخانه های فاژی حاوی قطعات ژنی نواحی متغیر آنتی‏بادی برای جداسازی فاژهای اختصاصی استفاده شد. غنی‏سازی جمعیت فاژهای اختصاصی با انجام سه مرحله غربالگری بر علیه پروتئین های خالص شده pthA و HrpEانجام شد و اختصاصیت فاژهای حاصله بر علیه آنتی‏ژن توسط آزمون الیزا بررسی شد. فاژهای نوترکیب قابلیت اتصال به پروتئین‌های pthA و HrpE را داشته و قادر به ردیابی گیاهان آلوده به بیماری شانکر باکتریایی مرکبات نیز بودند. از فاژهای جداسازی شده می‏توان به منظور تولید آنتی‏بادی اختصاصی مونوکلونال استفاده نمود.