خالص‌سازی و تعیین ویژگی‌های بیوشیمیایی فنل‌اکسیداز همولمف شب‌پره برگ‌خوار توت Glyphodes pyloalis (Lep.: Pyralidae)

Abstract

آنزیم فنل­ اکسیداز (EC 1.14.18.1)، یکی از آنزیم­های کلیدی در رشد و ایمنی حشرات می­باشد و مهار این آنزیم می­تواند به­عنوان روشی جدید برای کنترل آفات مورد استفاده قرار گیرد. شب­پره برگ­خوار توت (<em>Glyphodes pyloalis</em> Walker)، یکی از آفات مهم درختان توت در شمال ایران است که با تغذیه از برگ توت در پرورش کرم ابریشم اختلال ایجاد می­کند. در این تحقیق، آنزیم فنل­اکسیداز از همولمف شب­پره برگ­خوار توت با استفاده از رسوب با سولفات آمونیوم، کروماتوگرافی ژل و کروماتوگرافی تبادل یونی خالص شد. وزن ملکولی دو ایزوفرم آنزیم با استفاده از SDS-PAGE به­ترتیب 69/66 و 70/53 کیلودالتون به­دست آمد. اثرات بازدارنده­ها نشان داد که روش مهارکنندگی 4-هگزیل رسورسینول از نوع رقابتی و اما برای کوئرسین هیدرات و کوجیک اسید از نوع مختلط می­باشد. هم‌چنین، بررسی ویژگی­های آنزیمی نشان داد که اسیدیته مطلوب و دمای بهینه آنزیم فنل­اکسیداز به­ترتیب برابر با 7 و 35 درجه سلسیوس بود و آنزیم در دماهای 40، 45 و 50 درجه سلسیوس تا 30 دقیقه پایدار بود. اثر یون­های فلزی روی آنزیم خالص نشان داد که یون Zn²⁺ کاهشی معنی‌داری بر فعالیت آنزیم داشت.