جداسازی و همسانه‌سازی (cloning) cDNA ژن منگنز پراکسیداز (mnp) از قارچ خوراکی دکمه‌ای سفید (Agaricus bisporus)، مقدمه‌ای بر دست‌ورزی ژنتیکی

Abstract

تولید و پرورش قارچ ‌ خوراکی، یکی از کاربردهای تجاری فناوری ‌ های میکروبی به منظور تبدیل زیستی ضایعات بخش کشاورزی به فرآورده ‌ های با ارزش غذایی است. در قارچ­ خوراکی دکمه‌ای ( ‌Agaricus ‌bisporus ) آنزیم‌های مختلفی از ابتدای رشد میسلیومی تا انتهای دوره میوه­دهی، تجزیه ترکیبات لیگنینی را در محیط کمپوست برعهده دارند. یکی از مهمترین این آنزیم‌ها، آنزیم منگنز پراکسیداز است که سهم عمده­ای در تجزیه ترکیبات لیگنینی دارد. به منظور انجام مطالعات ملکولی بر روی آنزیم منگنز پراکسیداز در قارچ خوراکی دکمه­ای سفید نژاد IM008 و آماده نمودن زمینه برای افزایش تولید این آنزیم در قارچ خوراکی دکمه­ای، اقدام به جداسازی و همسانه‌سازی cDNA ژن کدکننده آنزیم منگنز پراکسیداز گردید. برای این منظور استخراج RNA از میسلیوم­های رشد یافته قارچ خوراکی بر روی محیط‌کشت مایع عصاره کمپوست انجام شد و cDNA آن به‌وسیله آنزیم رونوشت بردار معکوس ساخته شد. پس از تکثیر قطعه مورد نظر به‌وسیله واکنش زنجیره‌ای پلیمراز، قطعه تکثیرشده در ناقل pTZ57R/T قرار گرفت و سپس به باکتری E.coli سویه DH5α منتقل گشت. پس از استخراج پلاسمید از باکتری‌های تراریخته، پلاسمید استخراج شده مورد هضم آنزیمی قرار گرفت و در مرحله آخر قطعه تکثیرشده تعیین توالی شد. در نتایج، بلاست توالی نوکلئوتیدی در مکان­های بازهای نوکلئوتیدی با شماره‌های 657 و 850 با توالی ژن mnp موجود در بانک اطلاعاتی NCBI تفاوت داشت که به ترتیب، سبب تغییر اسید آمینه­ ایزولوسین به والین و اسید آمینه سرین به آلانین در توالی اسیدآمینه قطعه cDNA ‌ همسانه شده، می­شود.