ردیابی همزمان سه ویروس موزائیک معمولی، موزائیک معمولی بافت مرده‌ی لوبیا و موزائیک خیار با استفاده از Multiplex-RT-PCR

Abstract

ویروس‌ موزائیک معمولی لوبیا (<em>Bean common mosaic virus</em>, BCMV)، ویروس موزائیک معمولی بافت مرده‌ی لوبیا (<em>Bean common mosaic necrosis virus</em>, BCMNV) و ویروس موزائیک خیار (<em>Cucumber mosaic virus</em>, CMV) از ویروس‌های بذربرد لوبیا می‌باشند که به طور جدی باعث افت کمی و کیفی این محصول می‌شوند. بدلیل وجود گزارش‌های متعدد از آلودگی مخلوط لوبیا با این سه ویروس، معرفی روشی دقیق، سریع و حساس برای ردیابی همزمان CMV، BCMV و BCMNV در گیاه لوبیا می‌تواند نقش مهمی را در جلوگیری از انتشار ویروس و گسترش خسارت آنها و نیز غربال گیاهان سالم داشته باشد. در پژوهش حاضر برای ردیابی همزمان BCMV، BCMNV، CMV و نیز ژن 18S rRNA بعنوان کنترل داخلی، روش Multiplex RT-PCR استفاده شد. برای این منظور ابتدا لوبیای آلوده به این سه ویروس توسط DAC-ELISA ردیابی شد. آران‌آ کل استخراج و سپس cDNA با استفاده از آغازگرهای تصادفی شش نوکلئوتیدی ساخته شد. واکنش پی‌سی‌آر با استفاده از آغازگرهای اختصاصی برای هر ویروس و کنترل داخلی بصورت جداگانه و یا در ترکیب با یکدیگر بطور موفقیت آمیز قادر به تکثیر قطعات در حدود 470 جفت بازی برای BCMV، حدود 500 جفت بازی برای کنترل داخلی، حدود 704 جفت بازی برای BCMNV و حدود 870 جفت بازی برای CMV گردیدند. این روش قابلیت ردیابی این سه ویروس را در 100 نانوگرم از آر‌ان‌ای کل دارد.