شناسایی، جداسازی و همسانه سازی ژن سیتوکروم p450 از آویشن باغی

Abstract

تیمول یکی از پرکاربردترین متابولیت ثانویه درگیاه آویشن (<em>Thymus vulgaris </em>L.) بعنوان دارو می‏باشد. یکی از ژن هایکلیدی که در سنتز آن نقش دارد ژن<em> سیتوکروم</em><em>p450</em> است. به منظور جداسازی و همسانه سازی آن ابتدا استخراج RNA انجام شد و پس از ساخت cDNA با استفاده از آغازگرهای طراحی شده از مناطق حفاظت شده در حضور آنزیم HF که خاصیت ′ 3 به ′5 اگزونوکلئازی دارد عمل تکثیر صورت گرفت. در مرحله اول، همسانه سازی به روش T/A کلونینگ در پلاسمید pTG19 صورت گرفت. انتخاب نوترکیب ها از طریق سیستم PCR کلونی و هضم آنزیمی با <em>Bam</em>HI انجام شد. قطعات همسانه شده برای تایید نهایی توالی یابی شدند. به منظور همسانه سازی در وکتور بیانی pBI121^GUS-9قطعه برش خورده با آنزیم <em>Bam</em>HI در سایت همولوگ در وکتور pBI121^GUS-9تحت پروموتر 35s و خاتمه دهنده Nos همسانه شد. تایید کلونی‏های نوترکیب با PCR کلونی و هضم آنزیمی انجام شد. وکتور نوترکیب گیاهی طراحی شده میتواند جهت پژوهش‏های بعدی به منظور فرا بیان تیمول مورد استفاده قرار گیرد.