جداسازی مایکوباکتریوم ایویوم زیر گونه پاراتوبرکولوزیس از نمونه‌های مشکوک و تائید آن به روش Nested-PCR

Abstract

پاراتوبرکلوزیس (بیماری یون) بیماری مزمن گرانولوماتوزی روده باریک توسط مایکوباکتریوم ایویوم تحت گونه پاراتوبرکولوزیس (MAP) ایجاد می‌شود. در کنترل بیماری، مهم‌ترین اقدام تشخیص و جداسازی حیوانات آلوده می‌باشد لذا هدف این بررسی جداسازی عامل این بیماری از دام‌های مشکوک و در ادامه تائید جدایه‌ها با استفاده از تست‌های مولکولی بود. برای این منظور ۱۴۲ نمونه مشکوک ارسالی از استان‌های اصفهان، البرز، تهران، خراسان شمالی، خوزستان، زنجان، فارس، قزوین، کرمان و گلستان پس از آلودگی‌زدایی بر روی محیط کشت هرالد اگ حاوی مایکوباکتین و بدون مایکوباکتین کشت داده شدند. پس از استخراج DNA، -16S rRNA PCR و سپس از نمونه‌های مثبت Nested-PCR انجام شد. در مجموع از ۱۴۲ نمونه مشکوک ۴۷ جدایه بدست آمد. در گسترش میکروسکوپی همه جدایه‌های مثبت در رنگ‌آمیزی زیل نلسون باسیل اسید فاست مشاهده گردید و در 83 نمونه از مجموع ۱۴۲ نمونه مورد آزمایش و همچنین از سویه‌های مایکوباکتریایی در جواب 16s rRNA PCRباندی در ناحیه bp 543 مشاهده شد که نشاندهنده حضور مایکوباکتریوم در نمونه‌های فوق بود. از تمامی جدایه‌ها و سویه‌های کنترل مثبت و منفی Nested-PCR انجام پذیرفت که در مرحله اول باند bp 398 توسط پرایمرهای P90 و P91 و در مرحله بعد قطعه‌ای به طول bp 298 توسط پرایمرهای AV1 و AV2 حاصل گردید که نشان‌دهنده وجود مایکوباکتریوم پاراتوبرکولوزیس در نمونه‌ها بود. بر اساس این مطالعه Nested-PCR به عنوان روش مناسب تشخیص سریع قطعی موارد بیماری پیشنهاد می‌گردد.