کلونینگ و بیان ژن hly Listeria monocytogenes در Lactococcus lactis

Abstract

ژن hly یکی از مهم‌ترین عوامل ویرولانس Listeria monocytogenes می‌باشد که پروتئین لیستریولیزین (O (LLO را رمزگذاری می‌کند. LLO یک پروتئین ایمونوژن با قابلیت بالاست، که قادر به برانگیختن ایمنی سلولی و هومورال است و علاوه بر فعالیت همولیتیک، عملکردهای متعدد دیگری نیز دارد. این پروتئین با تخریب فاگولیزوزوم به فرار باکتری از سیتوپلاسم، زنده ماندن و رشد درون سلولیL. monocytogenes کمک می کند.از طرفی Lactococcus lactis سویه ای از باکتریهای اسید لاکتیک می‌باشد که برای بیان پروتئین‌های نوترکیب کاربرد زیادی دارد. هدف ما در این تحقیق بیان آنتی ژن نوترکیب LLO در سویه L. lactis بود.که این کاردر ابتدا با واسطه پلاسمید pTG19-T (وکتور T/A کلونینگ) و سپس با استفاده از پلاسمید pNZ8110 که مربوط به سیستم پلاسمیدهای بیانی ترشحی مختص L. lactis می‌باشد، انجام گردید. ژن hly، با طراحی محل برش آنزیم‌های محدود‌کننده در دو سر ژن، وارد پلاسمید شده و پس از کلونینگ و تکثیر در E. coli MC1061 بعنوان میزبان واسط با روش الکتروپوریشن وارد L. lactis گردیده و در نهایت پروتئین LLO بیان گردید. بیان این پروتئین با استفاده از روش SDS PAGE و وسترن بلات تایید شد.