طراحی و ارزیابی تست تشخیصی مولکولی Real time-PCR برای تشخیص بیماری هپاتیت B

Abstract

زمینه و اهداف : با استفاده از آزمایشات بیوشیمیایی که عملکرد کبد را مشخص می کنند، می توان ظهور هپاتیت را تایید کرد. از روش های سرولوژیکی برای تعیین آنتی ژن ها و آنتی بادی های اختصاصی ویروس استفاده می گردد. همچنین روش های هیبریداسیون اسید نوکلئیک و PCR که به منظور شناسایی DNA ویروس در سرم و بافت کبدی بیماران آلوده انجام می شود. <br /> مواد و روش ها : در این مطالعه برای شناسایی انواع ژنوتیپ های ویروس HBV ابتدا پرایمر های Froward و Reverse مناسب با استفاده از برنامه Primer 3 طراحی شد و هم چنین با بهره گیری از ژن های خانه دار β-Actin انسانی، پرایمری به عنوان کنترل اخلی واکنش طراحی شد. همچنین علاوه بر پرایمر، پروب نشاندار شده (Taqman) دژنره برای ویروس HBV و ژن β-Actin طراحی شد. سپس با استفاده از تست PCR ساده عملکرد پرایمر های ویروس HBV و β-Actin را مشخص کرده و با انجام تست Gradient-PCR دمای بهینه برای پرایمر ها را مشخص نمودیم. با انجام تست Realtime-PCR از نمونه DNA های استخراج شده از بیماران و بررسی نتایج با سوابق قبلی بیماران به نتایج مشابه دست یافته ایم.<br /> یافته ها : پرایمر و پروب دژنره طراحی شده در این مطالعه توانایی شناسایی و سنتز انواع ژنوتیپ ویروس هپایتیت B را دارد و با توجه به تست Realtime-PCR انجام شده با نمونه DNA بیماران، بررسی و مقایسه نتایج با سوابق قبلی بیماران که با کیت های شناسایی تجاری رایج آزمایش شده بود نشان داد که نتایج یکسان و قابل قبول است