خالص‌سازی و تعیین ویژگی‌های لیپاز گوارشی سن معمولی گندم، Eurygaster integriceps Puton (Hemiptera: Scutelleridae)

Abstract

دانه‌های گندم حاوی 13-8 درصد چربی در ژرم‌پلاست خود هستند که در سطح مولکول‌های نشاسته قرار گرفته و سبب افزایش کیفیت آرد حاصل می‌شوند. حشرات برای استفاده از منابع غذایی به آنزیم‌های گوارشی وابسته هستند. علیرغم اینکه چربی‌ها بخش قابل توجهی از مولکول‌های غذا را تشکیل می‌دهند، اما پژوهش‌های کمی در مورد آنزیم‌های تجزیه‌کننده آنها انجام شده‌است. در این پژوهش، آنزیم لیپاز گوارشی از معده سن معمولی گندم، Eurygaster integriceps که آفت اصلی گندم در ایران است خالص‌سازی و تعیین ویژگی شد. فرآیند خالص‌سازی، آنزیمی با وزن مولکولی 4/25 کیلودالتون، بازیابی 58/19 درصد، نسبت خالص‌سازی 70/69 و فعالیت ویژه 37/2 میکرومول بر میلی‌گرم پروتئین را نشان داد. آزمایش‌های اسیدیته و دمای بهینه بیشترین فعالیت آنزیمی را در اسیدیته 6 و دمای 25 درجه سلسیوس نشان دادند. انکوباسیون آنزیم در این مقادیر نشانگر ثبات آنزیمی به مدت 3-1 ساعت بود. غلظت‌های مختلف EDTA و PMSF برای مشخص کردن ویژگی مکان فعالیت آنزیم استفاده شدند. غلظت‌های مختلف EDTA تاثیری بر فعالیت آنزیمی نداشت اما PMSF به‌طور معنی داری آن را کاهش داد. تجزیه و تحلیل کینتیک، بازدارندگی مخلوط PMSF را روی لیپاز خالص شده سن گندم نشان داد. مطالعه لیپازهای حشرات به دلیل نقش هیدرولیزکنندگی آنها علیه بازدارنده-های پروتئازی استفاده شده در گیاهان تراریخته اهمیت دارد و می‌تواند راهگشای مدیریت پایدار آفات از طریق گیاهان تراریخته شود.