کمیت سنجی قارچ Verticillium dahliae در ریشه چهار رقم زیتون با استفاده از تکنیک Real- time PCR

Abstract

پژمردگی ورتیسلیومی یکی از بیماری¬های مهم زیتون است که با تخریب آوندها باعث خشکیدگی شاخهها، کاهش عملکرد و در نهایت مرگ درختان بیمار میشود. در این تحقیق ابتدا از درختان زیتون مشکوک به پژمردگی ورتیسیلیومی در منطقه طارم در استان زنجان نمونه برداری شد. پس از کشت و خالص سازی قارچ، استخراج دی ان اِ با روش سی تب انجام شد . برای ارزیابی واکنش ارقام زیتون، ریشه نهال¬های پنج ماهه ارقام زرد ، آربیکن، آبلونکا و کرونایکی به روش غوطه ور سازی با سوسپانسیون107 اسپور جدایه برگریز قارچ عامل بیماری تلقیح گردید. استخراج دی ان اِ از ریشه نهال¬های تلقیح شده بلافاصله و سپس در زمان های 2-7-15-27-41-56-77 روز بعد از تلقیح انجام گردید. روند افزایش تدریجی میزان دی ان اِ قارچ موجود در ریشه نهال¬ها با روش Real- time PCR و با استفاده از سایبرگرین همراه با آغازگرهای اختصاصی کمیت سنجی گردید. نتایج بررسی¬ نشان داد که در طول زمان، نسبت دی ان اِ قارچ به دی ان اِ کل در ارقام زرد و آربیکن نسبت به ابلونکا وکرونایکی افزایش بیشتری داشتند و رقم کرونایکی محدودیت بیشتری برای استقرار پاتوژن در روی ریشه ایجاد نمود. با این حال در روی ریشه رقم زرد، قارچ عامل بیماری توانست با سرعت بیشتری تکثیر یافته وعلایم شدیدتری از بیماری را ظاهر سازد. نتایج این بررسی نشان داد که تکنیک Real-time PCR ابزار مناسبی برای ارزیابی مقاومت ژنوتیپ¬های مختلف زیتون نسبت به بیماری پژمردگی ورتیسلیومی است که می¬تواند در کنار روش¬های معمول برای غربالگری ارقام مقاوم به بیماری مورد استفاده قرار گیرد.