تولید و تخلیص آنتی‎بادی پلی‎کلونال علیه تتانوتوکسین

Abstract

مقدمه: کزاز نوعی بیماری دستگاه اعصاب است که با افزایش صلابت و گرفتگی‌های عضلات مشخص می‌شود. عامل این بیماری کشنده، توکسین کلستریدیوم تتانی می‌باشد. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره L،‌ HN و HC می‌باشد. زنجیره HC بخش اتصال‌دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندید واکسن مطرح می‌باشد. هدف از این مطالعه استفاده از ژن صناعی زنجیره HC تتانواسپاسمین و بررسی ایمنی‌زایی پروتئین نوترکیب حاصل از آن و نهایتاً تهیه سرم و آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه آن می‌باشد. مواد و روش‌ها: از میزبانE. coli Bl21 DE3 ، دارای وکتور pET28a حامل ژن نوترکیب زنجیره HC تتانوتوکسین، جهت بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب مورد مطالعه استفاده شد. ایمنی‌زایی آن در حیوان آزمایشگاهی صورت گرفت. ضمن بررسی تیتر آنتی‌بادی، آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه تتانوتوکسین از سرم تخلیص گردید. یافته‌ها: پس از بهینه‌سازی بیان و تخلیص، پروتئین نوترکیب بیانی حاصل با وسترن‌بلاتینگ تأیید گردید. ایمنی‌زایی در مدل موش نشان از تیتر بالای آنتی‌بادی علیه پروتئین نوترکیب داشت. تخلیص آنتی‌بادی پلی‌کلونال از سرم حیوانات ایمن به روش ستون G انجام گردید. نتیجه‌گیری: تولید پروتئین نوترکیب بخش HC و بررسی ایمنی‌زایی آن، نشان‌دهنده تیتر بالایی از آنتی‌بادی پلی‌کلونال در سرم حیوان علیه تتانوتوکسین می‌باشد.