بیان دومین III پروتئین پوششی ویروس تب دانگ (سروتیپ 1) به صورت نوترکیب، با هدف طراحی واکسن

Abstract

هدف: هدف این مطالعه ایجاد آنتی‌ژن نوترکیبی از پروتئین پوششی سروتیپ 1 ویروس، به منظور دستیابی به کاندیدای واکسن دانگ است. بنابراین، قابلیت تولید دومین III این پروتئین در باکتری مورد بررسی قرار گرفته است.

مواد و روش ها : به منظور دستیابی به یک توالی مورد توافق، هم ردیفی توالی های مختلف مربوط به دومین III با نرم افزار Megalign انجام شد . برای پیش بینی ساختار پروتئین از نرم افزار Modeller و برای بهینه سازی توالی ژن برای بیان در. Coli Eاز نرمافزار Optimizer استفاده شد. پس از سنتز و کلونینگ ژن در وکتور بیانی PET21 انتقال وکتور و بهینه سازی بیان ، پروتئین در سویه بیانی E. coli انجام شد. برای تأیید بیان پروتئین نوترکیب از روش های استاندارد الکتروفورز پروتئین ها و لکه گذاری وسترن استفاده شد . یافته ها: یک توالی مورد توافق برای دومین III پروتئین پوششی سروتیپ 1 ویروس دانگ با استفاده از روش هم ردیفی چندگانه توالی های مختلف به دست آمد که تحت عنوان 1EDIII نامیده شد . پیش بینی ویژگی های پروتئین هدف با روش های بیوانفورماتیک انجام شد . به منظور بیان حداکثری پروتئین نوترکیب در باکتری، توالی ژن از لحاظ الگوی کدونی و درصدGC بهینه سازی شد. همسانه سازی ژن هدف پس از سنتز، در وکتور بیانیpET21 در جایگاه های XhoI و NdeI انجام شد . به منظور ایجاد پیوند دی‌سولفیدی در ساختار پروتئین، بهینه‌سازی بیان EDIII1 در میزبان بیانی Origami انجام شد. در نهایت پس از خالص‌سازی پروتئین هدف با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی برای شناسایی آن از آزمون لکه‌گذاری وسترن استفاده شد. نتایج این مطالعه کارایی سیستم بیانی باکتریایی را در بیان دومین III پروتئین پوششی ویروس دانگ نشان داد. . نتیجه گیری: نتایج این مطالعه کارایی سیستم بیانی ب اکتریایی را در بیان دومین III پروتئین پوششی ویروس دانگ نشان داد .