تخلیص و جدا سازی پادگن های اگزو توکسین (Bacillus anthracis (PA،LF،EF سویه 34F2 به روش اولترا فیلتر و HPLC

Abstract

بیماری آنتراکس(شاربن) یکی از مهمترین بیماری‌های مشترک بین انسان ودام می باشد. عامل آن باکتری گرم مثبت و میله ای شکل B.anthracis است. B.anthracis دارای دو عامل بیماری زای شناخته شده شامل یک سم پروتئینی سه قسمتی ویک کپسول پلی دی گلوتامیک اسید می‌باشد. با توجه به این که توکسین باکتری نقش مهمی در بیماریزایی وتهیه واکسن دارد، لذا جداسازی و تخلیص آن همواره مورد توجه محققین بوده است. سم سه قسمتی شامل پادگن های PA, LF, EF می‌باشد. درک بیشتر اکتیویته سم، نقش هر یک از اجزأ توکسین در بیماری زائی وحفاظت در برابر بیماری وتهیه پادگن برای به کار رفتن در سیستم های تشخیص نیازمند درجات بالای تخلیص می‌باشد. در این تحقیق پس از کشت باکتری روی محیط کشت اختصاصی و جدا نمودن محلول رویی از پیکره باکتری، این محلول از اولترا فیلتر(UF) با Cutoff‌ 30000 و 50000 و 100000 عبور داده شد و سپس عملیات ترسیب با سولفات آمونیوم و دیالیز انجام گردید.که نهایتاً با استفاده از دستگاه HPLC پادگن های توکسین B.anthracis از یکدیگر جدا شد و در روش الکتروفورز این پادگن ها (EF,LF,PA) به ترتیب با وزن مولکولی های 86, 87, 85 کیلودالتون و با خلوص بالا مشخص گردید.