اثر استرادیول 17- بتا بر بیان ژن آنزیم های استروژنیک و پروژستاژنیک در سلول های گرانولوزا گاوی در شرایط برون تنی

Abstract

هدف از مطالعه حاضر بررسی تاثیر استرادیول 17- بتا بر بیان نسبی ژن های گیرنده FSHR) FSH)، گیرنده LHR) LH)و آنزیم های استروژنیک و پروژستاژنیک (Progestagenic) در سلول های گرانولوزای کشت داده شده گاو هلشتاین بود. به طور خلاصه، فولیکول های دو تا پنج میلی متری از تخمدان گاوهای بالغ از کشتارگاه جمع آوری شدند، پس از جدا کردن سلول های گرانولوزا در محیط DMEM/F12 به مدت شش روز در در پلیت هایی 24 تایی کشت داده شدند و به منظور شمارش تعداد سلول ها از رنگ تریپان بلو 4/0 درصد استفاده شد. تیمارها شامل 1) 500 هزار سلول گرانولوزا در ml 500 محیط کشت، 2) 500 هزار سلول گرانولوزا در ml 200 محیط کشت، 3) 500 هزار سلول گرانولوزا در ml 500 محیط کشت و استرادیول 17- بتا و 4) 500 هزار سلول گرانولوزا در ml 200 محیط کشت و استرادیول 17- بتا بودند. برای اندازه گیری استرادیول 17- بتا محیط های کشت در روز شش جمع آوری شدند بر اساس روش رادیوایمونواسی (RIA)، غلظت استرادیول 17- بتا اندازه گیری شد. سلول ها بوسیله ترایزول جمع آوری شدند و تا زمان استخراج RNA در 80- درجه سانتیگراد نگهداری شدند. داده ها با استفاده از نرم افزار JMP مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. نتایج نشان داد افزودن استرادیول 17- بتا به محیط کشت سلول های گرانولوزای گاو، از یک سو با افزایش بیان ژن آنزیم های کلیدی در تبدیل اندروژن به استرادیول 17- بتا (آنزیم های استروژنیک) غلظت استرادیول 17- بتا تولید شده به وسیله سلول های گرانولوزا را افزایش داد. از سوی دیگر مسیر ساخت پرژوسترون را با کاهش بیان ژن آنزیم های کلیدی در تبدیل کلسترول به پروژسترون (آنزیم های پروژستاژنیک) مهار کرد و در نهایت سبب کاهش لوتئینه شدن و بهبود سلامت فولیکول شد.