ساخت سازه RNA سنجاق سری القاءکننده خاموشی ژن و بررسی مقاومت ناشی از آن در برابر ویروس برگ بادبزنی مو GFLV

Abstract

<strong> استفاده از ارقام مقاوم گیاهی بهترین راه برای کنترل عوامل ویروسی می ­باشد. القاء مقاومت به ­واسطه خاموشی</strong><strong>RNA </strong><strong>یک روش خوب برای ایجاد ارقام مقاوم به ویروس ­ها می­ باشد. ویروس برگ بادبزنی مو </strong><strong>(</strong><strong>GFLV</strong><strong><em>Grapevine fanleaf virus</em></strong><strong>) </strong><strong>عامل یکی از مخرب­ ترین بیماری­ های ویروسی مو در سراسر دنیا است. به ­منظور بررسی امکان ایجاد مقاومت به </strong><strong>GFLV</strong><strong> مو با استفاده از سیستم القاء مقاومت به ­واسطه </strong><strong>RNA</strong><strong>، از توالی نوکلئوتیدی دو ژن این ویروس برای ساخت سازه سنجاق­ سری استفاده شد که در آن قطعه ­ای از هر ژن به ­طور جداگانه در جهت سنس و آنتی سنس در دو طرف یک ناحیه اینترونی و در مقابل </strong><strong>35</strong><strong>SCaMV</strong><strong> در پلاسمید </strong><strong>pGA482G</strong><strong> قرار گرفت. جهت تراریختی</strong><strong>گیاهان </strong><strong><em>Nicotiana benthamiana </em></strong><strong>از سیستم </strong><strong><em>Agrobacterium</em></strong><strong> <em>tumefaciens</em> </strong><strong>استفاده شد. پس از تأیید انتقال ژن، گیاهان تراریخت به ­منظور ارزیابی مقاومت نسبت به </strong><strong>GFLV</strong><strong>، مایه­ زنی مکانیکی شدند. 10 روز پس از مایه ­زنی ویروس سه نوع واکنش مقاومت، حساسیت و تأخیر در بروز علایم در گیاهان مایه ­زنی شده مشاهده شد. آزمون الایزا نیز عدم حضور ویروس را در گیاهان مقاوم تراریخت تأیید کرد. در این گیاهان حتی یک ماه پس از مایه­ زنی، هیچ ­گونه علایم ویروسی مشاهده نشد. درحالی­ که گیاهان تراریختی که حضور ویروس در آن­ ها با آزمون الایزا ردیابی شد، علایم موزاییک را یک هفته پس از مایه ­زنی و مشابه تیپ وحشی گیاهان مایه ­زنی شده با </strong><strong>GFLV</strong><strong> نشان دادند. نتایج این تحقیق نشان داد که سازه به ­کار رفته برای القاء مقاومت کارایی بالایی داشته و می ­توان از آن برای ایجاد مقاومت در ارقام مختلف مو نسبت به </strong><strong>GFLV</strong><strong> استفاده کرد.</strong>