تولید آنتی‌ژن پلی‌اپی‌توپی نوترکیب HPV16-E6: بررسی اثر سویه‌ها و شرایط محیطی متفاوت

Abstract

مقدمه: سرطان دهانه رحم با حدود 528000 مورد بیمار و 266000 مرگ در سال، یکی از سرطان‌های رایج در بین زنان جهان به شمار می‌رود و عفونت پایدار با ویروس پاپیلومای انسانی ((HPV عامل اصلی آن است. واکسن‌های مبتنی بر پپتید مشتق‌شده از دو پروتئین انکوژن E6 و E7 به‌علت ایمنی و پایداری بالا و سهولت در تولید، پتانسیل بالایی برای تولید واکسن درمانی HPV نشان داده‌اند. در این مطالعه اثر سویه‌های مختلف اشرشیاکلی در کنار پارامترهای محیطی ازجمله دما، زمان القایی و غلظت القاکننده بر میزان بیان پروتئین پلی اپی‌توپ نوترکیبHPV16-E6 بررسی می‌شود.مواد و روش‏‏ها: در این مطالعه ژن بهینه‌شدة پروتئین نوترکیب E6، در درون وکتور دارای پروموتور T7 کلون شد. وکتور نوترکیب به سویه‌های اشرشیاکلی BL21(DE3)، BL21(DE3)-AI، Rosetta، C41(DE3) و BL21(DE3)-pLysS ترانسفورم شد و توانایی این سویه‌ها برای بیان پروتئین نوترکیب مدنظر در شرایط مختلف محیطی مقایسه شد. بیان پروتئین نوترکیب E6 در سویه‌های ذکرشده، در دو دمای 25 و 37 درجه سانتی‌گراد و غلظت‌های 0/1 و 1/0 میلی‌مولار از IPTG و زمان‌های مختلف انکوباسیون بررسی شدند.نتایج: پس از انجام بهینه‌سازی بیان، شرایط بهینه برای بیان پروتئین نوترکیب E6 به دست آمد. بیشترین میزان بیان در سویه اشرشیاکلی BL21(DE3)-AI و در شرایط Optical Density (OD)=0.9، غلظت 1/0 میلی‌مولار IPTG و مدت زمان القای 16 ساعت در دمای 25 درجه سانتی‌گراد به دست آمد.بحث و نتیجه‏گیری: نتایج به‌دست‌آمده از این مطالعه می‌توانند برای تولید پروتئین E6، به‌عنوان کاندید واکسن درمانی در درمان سرطان‌های مرتبط با HPV استفاده شوند.