ارزیابی محاسباتی، طراحی و بیان آنتی‌بادی هیبرید به فرم تک زنجیره(scFv) Single Chain Fragment Antibody برای شناسایی پروتئین سطحی Factor H binding Protein (fHbp) باکتری نایسریا مننژیتیدیس

Abstract

سابقه و هدف: فاکتور بیماری­زای پروتئین متصل شونده به فاکتور H (fHbp) نقش حیاتی در بقای پاتوژن در میزبان دارد. آنتی­بادی­های تک زنجیره به فرم scFv کاربردهای درمانی و تشخیصی دارند. هدف از انجام این مطالعه، استفاده از روش­های محاسباتی، طراحی، بیان و بررسی قدرت اتصال آنتی بادی تک زنجیره هیبریدی برای شناسایی باکتری نایسریامننژیتیدیس، عامل بیماری مننگوکوک، بود. روش بررسی: در این تحقیق با انجام یک سری ارزیابی­های محاسباتی (مدلسازی آنتی ژن، آنتی بادی و داکینگ آنتی ژن-آنتی بادی)، آنتی بادی هیبریدی با قدرت اتصال بالا به پروتئین fHbp طراحی شد. سازه ژنی آن در وکتور بیانی pET28a(+) سنتز شد و پس از بیان در باکتری BL21 و خالص سازی با استفاده از رزین Ni-NTA، میل اتصال آن با پروتئین fHbp با استفاده از روش الایزا بررسی شد. یافته ها: فرم هیبریدی (VH1-VL2) با استفاده از ارزیابی­های محاسباتی انتخاب شد. بیان سازه طراحی شده با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ تائید شد. پس از خالص سازی آنتی بادی و آنتی ژن fHbp، در بررسی­های الایزا، میل اتصال این فرم هیبریدی scFv M10-9 ×6/7 محاسبه شد. نتیجه گیری: میل اتصال مناسب فرم هیبریدی آنتی بادی نشان می­دهد که با استفاده از روش­های مهندسی آنتی­بادی و روش­های محاسباتی، می­توان به اشکال دیگری از آنتی بادی­های تک زنجیره دست یافت که برای اهداف درمانی و تشخیصی کاربرد دارند. واژگان کلیدی: آنتی بادی تک زنجیره هیبرید، باکتری نایسریا مننژیتیدیس، پروتئین متصل شونده به فاکتور H، کلونینگ و بیان پروتئین.