دستکاری ژنتیکی سلولهای بنیادی مزانشیمی انسانی مشتق از چربی با miR-34a

Abstract

سابقه و هدف: ژن تراپی ایمن و موثر به عنوان یکی از اهداف درمانی در بسیاری از بیماری­ها در نظر گرفته می­شود. با توجه به نقش مهم سلول­های بنیادی در سل تراپی، این مطالعه با هدف تولید سلول­های بنیادی مزانشیمی مشتق از چربی انسان (hASC) با افزایش بیان miR-34a انجام شد. روش بررسی: توالی پیش ساز hsa-mir-34a در وکتورPCDH لنتی ویروس کلون شد. وکتور نوترکیب و دو وکتور کمکی یعنی psPAX و pMD2 با روش کلسیم فسفات به داخل HEK-293T منتقل شدند. سوپ ویروسی جمع آوری و با اولترا سانتریفیوژ تغلیظ شد. سلول­هایHEK-293T ترانسدیوس شده در روز چهارم با فلوسایتومتری ارزیابی شدند. پس از تعیین غلظت ویروسی، سلول­های hASC با ویروس­های تغلیظ شده ترانسدیوس شدند. استخراج RNA و سنتز cDNA به منظور ارزیابی میزان بیان miR-34a با Real Time PCR انجام شد. یافته ­ها: توالی پیش ساز hsa-mir-34a کلون شده در وکتور PCDH با colony-PCR و DNA sequencing تائید شد. ترانسداکشن سلول­های HEK-293T و hASC در زیر میکروسکوپ معکوس فلورسنت دار و فلوسایتومتری مورد تائید قرار گرفتند. ارزیابی میزان بیان miR-34a در سلول­های آلوده به ویروس نوترکیب نشان داد که نسبت بیان miR-34a در گروه تست به طور معنی­داری بیشتر از گروه کنترل بود (001/0=P). نتیجه­ گیری: این مطالعه نشان دادکه از سیستم­های لنتی­ویروس­ها می­توان برای وارد کردن ژن­های خارجی نظیر miR-34a به سلول­ها استفاده کرد. همچنین این مطالعه نشان داد که سلول­های بنیادی دستکاری شده ژنتیکی به عنوان delivery system برای انتقال miR-34a و یا هر ژن دیگری می­توانند استفاده شوند.