کلون‌سازی، بیان و تخلیص پروتئین اینتگراز ویروس HIV و بررسی آنتی‌ژنیسیته آن

Abstract

زمینه و هدف: ارتقاء روش‌های تشخیصی جهت شناسایی افراد آلوده به HIV، یکی از راه‌های مقابله با انتشار ویروس به‌شمار می‌رود. به‌دلیل بالابودن میزان موتاسیون‌ در این ویروس، لازم است تا برای راه‌اندازی روش‌های ایمنواسی تشخیصی از پروتئین‌های محافظت‌شده، استفاده شود. به‌دلیل آنکه پروتئین اینتگراز یکی از محافظت‌شده‌ترین پروتئین‌های HIV است، آنتی‌ژن مناسبی برای این منظور به‌شمار می‌رود. در این مطالعه ضمن کلون‌سازی و تخلیص این پروتئین، ایمنوژنیسیته آن نیز مورد بررسی قرار گرفته است.

روش کار: ژن اینتگراز در وکتور بیانی pET28a کلون گردید. پلاسمید نوترکیب حاصله به باکتری E.coli انتقال یافته و بیان پروتئین با استفاده از IPTG القاء شد. بررسی ایمنوژنیسیته پروتئین بیان‌شده با تکنیک وسترن‌بلات صورت گرفت. تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی میل ترکیبی با رزین‌های Ni-NTA انجام پذیرفت.

یافته‌ها: القاء باکتری‌های ترانسفرم‌شده با IPTG به بیان پروتئین اینتگراز منجر گردید و به این ترتیب پس از بهینه‌سازی شرایط بیان، حدود 40 درصد پروتئین‌های باکتریایی به پروتئین نوترکیب مورد نظر اختصاص پیدا کرد. انجام وسترن بلات نشان‌دهنده واکنش ایمنی اختصاصی با سرم افراد آلوده به HIV بود. به‌ازاء هر یک لیتر کشت باکتری، 75 میلی‌گرم اینتگراز تخلیص گردید.

نتیجه‌گیری: پروتئین تولیدشده به‌واسطه حفظ خاصیت آنتی‌ژنیک خود، قابلیت به‌کارگیری در روش‌های تشخیصی ایمنواسی را دارد. با استفاده از بهینه‌سازی شرایط کشت و بیان پروتئین می‌توان به باکتری‌های نوترکیبی دست‌ یافت که تولید پروتئین در آن‌ها با بازده بالایی صورت می‌پذیرد و بنابراین امکان استفاده از آن‌ها در اهداف صنعتی وجود خواهد داشت.