کلون و بیان ژن fliC به‌عنوان کاندیدای واکسن علیه بیماری تیفوئید

Abstract

پیش‌زمینه و هدف: سالمونلا انتریکا یک پاتوژن زئونوز است که می‌تواند باعث تب تیفوئید در انسان و حیوان شود. این باکتری یکی از علل مهم عفونت‌های ناشی از مواد غذایی در انسان در سراسر جهان است. از مطالعات اخیر تخمین زده می‌شود که سالانه حدود 22 میلیون مورد ابتلا به این بیماری گزارش می‌شود که از این تعداد 200 هزار نفر را به کام مرگ می‌کشاند. فلاژلینی که توسط fliC کد می‌شود نقش مهمی در بیماری‌زایی دارد و می‌تواند به‌عنوان آنتی‌ژنی قوی در واکسن مورداستفاده قرار گیرد. این مطالعه باهدف تولید پروتئین نوترکیب fliC به‌عنوان یکی از کاندیداهای واکسن علیه بیماری سالمونلوز انجام شد.

مواد و روش‌ کار: توالی پروتئین fliC از پایگاه داده NCBI اخذ شد. برای بیان حداکثری، ژن موردنظر با توجه به ترجیح کدونی E. coli ساخته شد. ژن سنتتیک از وکتور pUC57 به وکتور بیانی pET28a+ زیرهمسانه‌سازی شد و سپس به میزبان E. coli BL21DE3 تراریخت شد. پروتئین نوترکیب با القاء IPTG بیان شد. برای بیان حداکثری، سه پارامتر شامل غلظت IPTG، زمان و دما بهینه‌سازی گردید. پروتئین نوترکیب حاوی His-Tag به‌وسیله ستون کروماتوگرافی تعویض یون Ni-NTA Agarose خالص‌سازی شد. پروتئین خالص‌شده با آزمایش وسترن بلات تائید شد.

یافته‌ها: وکتور نوترکیب با واکنش PCR و نیز آنالیز آنزیم‌های تحدیدی تائید شد. آزمایش SDS-PAGE وجود یک پروتئین 51 کیلو دالتونی با خلوص مناسب را نشان داد. همچنین آزمایش وسترن بلات با آنتی‌بادی His-tag پروتئین مدنظر را تائید نمود.

بحث و نتیجه‌گیری: امروزه استفاده از واکسن‌های نوترکیب بسیار موردتوجه قرار گرفته است. با توجه به اینکه در مطالعه حاضر ژن یکی از مهم‌ترین فاکتورهای بیماری‌‌زایی باکتری سالمونلا همسانه‌‌سازی و پروتئین مربوط به آن تولید و تخلیص شده است. این پروتئین می‌تواند به‌عنوان یکی از کاندیداهای مناسب در واکسن‌های نوترکیب علیه تیفوئید مورداستفاده قرار گیرد.