مطالعه فعالیت و ارزیابی اثرات pH و دما بر سرین پروتئاز و سیستئین پروتئاز در کرم بالغ فاسیولا هپاتیکا

Abstract

پیش‌زمینه و هدف: فاسیولوزیس یک بیماری انگلی مشترک است که توسط ترماتود فاسیولا هپاتیکا ایجاد می‌شود. پروتئازها جهت بقای انگل‌ها ضروری می‌باشند. هدف از این مطالعه جهت بررسی فعالیت و مطالعه اثرات pH و دما بر سرین پروتئاز و سیستئین پروتئاز در ترماتود فاسیولا هپاتیکا بود. مواد و روش‌ کار: ترماتودهای بالغ فاسیولا هپاتیکا از کبد گاوهای کشتار شده در کشتارگاه شهرستان ارومیه جدا شدند و میزان پروتئین آن‌ها اندازه‌گیری شد. فعالیت پروتئولیتیک عصاره کرم بالغ با استفاده از سوبسترای آزوکازئین در محدوده pH 2 تا 12 موردبررسی قرار گرفت. سوبسترای ویژه تریپسین، کیموتریپسین و کاتپسین B برای سنجش آنزیم‌های پروتئازی استفاده شد. اثر مهارکننده‌های پروتئازی پپساتین، DTT، PMSF و EDTA بر روی این آنزیم‌ها بررسی شد. برآورد دما و pH بهینه در محدوده دمایی 90-10 درجه سانتی‌گراد و 12-2 pH بود. یافته‌ها: pH بهینه فعالیت برای تریپسین و کیموتریپسین قلیایی و فعالیت پروتئولیتیکی و کاتپسین B اسیدی بود. فعالیت سرین پروتئاز و سیستئین پروتئاز در فاسیولا هپاتیکا ثبت گردید. دمای بهینه برای فعالیت تریپسین و کیموتریپسین در 50 درجه سانتی‌گراد و کاتپسین B در 40-30 درجه سانتی‌گراد بود. هر سه پروتئاز پایداری دمایی تا 40 درجه سانتی‌گراد را نشان دادند. بحث و نتیجه‌گیری: ثبات دمایی بالای پروتئازهای فاسیولا هپاتیکا نشان داد که به‌عنوان یک عامل بالقوه می‌توانند کاربردی زیستی در تهیه واکسن و داروهای ضد انگلی داشته باشند.