بررسی دو روش کروماتوگرافی تلفیقی و کروماتوگرافی افینیتی برای خالص‌سازی آلفا توکسین باکتری کلستریدیوم پرفرژنس تیپ A

Abstract

آلفا توکسین یا فسفولیپاز C (PLC ) توسط باکتری کلستردیوم پرفژنس تولید می‌گردد و خواص کشنده درمونوکرتیک را دارا می‌باشد. تمامی سویه‌های کلستردیوم قادر به تولید این توکسین می‌باشند که در توسعه میونکروز کلستریدی نقش بسزایی را ایفا می‌کنند. آلفا توکسین باعث بروز علائم در انسان و دام می‌گردد و تأثیرات کشنده بر سیستم روده‌ای را نشان می‌دهد. در این تحقیق سعی بر آن خواهیم داشت که روش‌های متفاوت خالص‌سازی و استخراج آلفا توکسین کلستردیوم پرفژنس تیپ A را با هم مقایسه نماییم. روش اول شامل خالص‌سازی آلفا توکسین با استفاده از تکنیک‌های ترکیبی کروماتوگرافی شامل رسوب‌دهی سولفات آمونیوم، کروماتوگرافی تبادل یون با استفاده از DEAE- Sephadex در مقادیر 7 و 9 pH و کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با استفاده از Sephadex G-100 بود، روش دوم مبتنی بر استفاده از کروماتوگرافی افینیتی اجرا گردید. درجه خلوص توکسین آلفا در هر مرحله از فرآیند خالص‌سازی با استفاده از SDS-PAGE ارزیابی گردید .با بررسی نتایج حاصل از دو روش فوق نتایج زیر حاصل گردید. بازدهی روش اول 88 درصد و بازده روش دوم 7/91درصد بود. مقادیر فعالیت ویژه برای روش اول و دوم به‌ترتیب U/mg 69170 و U/mg 71/105 محاسبه گردید. نتایج نشان داد که از روش کروماتوگرافی افینیتی می‌توان برای خالص‌سازی آلفا توکسین تولیدشده از کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ A با خلوص بالا و نسبت فعالیت به مقدار پروتئین (HU/mg) 108700 استفاده گردد.