شناسایی باکتریهای همزیست غالب دستگاه گوارش بید غلات (Sitotroga cerealella)

Abstract

در این پژوهش، باکتریهای همزیست دستگاه گوارش بید غلات شناسایی شد.برای پرورش بید غلات از جو با درصد پروتئین بالا استفاده شد ظرف حاوی جو بعد از آلوده سازی در اطاقک رشد در شرایط دمایی 24 درجه سلسیوس ورطوبت نسبی 65 درصـد نگهـداری شـدند. جهت جدا نمودن باکتری دستگاه گوارش بید غلات از بین جمعیت پرورش داده شده 10 لارو سالم انتخاب شد. دستگاه گوارش لاروها پس از ضد عفونی در اتانول 70 درصد، هیپوکلریت سدیم 5درصد و آب مقطر خارج شد سپس جهت همگن نمودن دستگاه گوارش از یک میلی‌لیتر بافر فسفات 0.1مولار با 7pH= استفاده شد.محتویات همگن‌ شده در محیط کشت نوترینت آگار کشت داده شدبرای انجام واکنش های زنجیره‌ای پلیمراز از5 میکرو لیتر Master Mix ، 2 میکرولیتر DNA استخراج شده ، 1.5 میکرولیتر پرایمر RP2 و 1.5 میکرو لیتر پرایمر FD1 و 15 میکرولیتر Distilled Water که حجم کلی این مواد باید به 25 میکرو لیتر برسد. فرآیند PCR با استفاده از پرایمر‌های عمومی FD1 و RP2 و توالی ژن 16srRNA در دستگاه ترموسایکلرانجام شد. توالی یابی با همکاری شرکت Bioneer انجام شد.ویژگیهای فنوتیپی باکتریهای جدا شده با روشهای استاندارد باکتری‌شناسی مشخص شد. بعد از بررسی تمام کلونی های تهیه شده و مقایسه نتایج بدست آمده بیشترین فراوانی از نظر تعداد کلنی مختص به باکتری mundtii Enterococcus بود و باکتری Enterobacter hormaechei از فراوانی کمتری در دستگاه گوارش بید برخوردار بود. همچنین با توجه به الکتروفورز انجام شده بالاترین باندهای مشاهده شده مربوط به باکتری hormaechei Enterobacter و کوتاهترین باند متعلق به mundtii Enterococcus میباشد.